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水稻(Oryza sativa L.)是中国最重要的粮食作物之一,我国约有65%的人口以水稻为主食,然而耕地面积减少及农村劳动力减少都迫使我们必须进一步提高单位面积土地上的粮食产量。水稻株型与水稻育种有着非常密切的关系,它对水稻的高产有着非常重要的作用。叶片是水稻主要的同化器官,稻谷90%~95%的物质都是来自水稻叶片光合作用的产物。目前,已经克隆出部分控制水稻株型的基因,但理想株型的分子机理仍有待进一步研究。克隆理想株型的相关调控基因,阐明其功能,将为理想株型品种的成功培育提供重要的理论基础。本实验通过Affymetrix水稻表达芯片数据筛选出一个受低温和高温诱导高水平表达的OsEL基因,分析该基因的序列发现该基因的蛋白序列含有翻译起始因子SUI1蛋白家族共有的SUI1保守结构域。克隆OsEL基因并构建植物表达载体,通过农杆菌介导转化水稻日本晴,对OsEL基因进行过量表达研究,发现该基因的过量表达引起水稻株型表型发生变化。在转基因植株中,叶片中脉变粗,气腔数目增加,且分蘖数增加,叶片直立。分析推测OsEL基因可能通过调控维管束细胞增殖而影响叶脉发育。
近年来,植物基因工程技术的迅速发展使得转基因植物及其产品与人们生活越来越密切。与此同时,转基因植物检测技术也在不断丰富和发展,现有的检测方法主要是在整合、转录、翻译等不同水平上检测转基因产物的存在。但各种方法都存在不同的缺点,如普通PCR缺乏特异性,假阳性较高;Southern blot和Western blot操作繁琐;Northern blot和ELISA检测成本高等。本研究利用TAIL-PCR(Thermal Asymmetric Interlaced PCR)和融合克隆结合建立一种简单、快速、特异性高的转基因植物检测方法,以两个转基因水稻植株(C3-3株系和TB-5株系)为例,通过TAIL-PCR获得其侧翼序列后,再在载体DNA序列和插入位点侧翼水稻基因组上设计一对特异引物,最终通过普通PCR方法,达到快速检测特定转基因产品的目的。本实验已针对C3-3株系和TB-5株系分别制作了转基因检测试剂盒,经测试,该试剂盒的操作简单、特异性高、假阳性率极低。