南方水稻黑条矮缩病毒P9-1的定点突变及其与化合物小分子的相互作用研究

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南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV)属于呼肠孤病毒科斐济病毒属。SRBSDV为球状病毒,有10条RNA基因组,其中S9-1被预测能编码病毒基质蛋白。病毒基质蛋白是病毒复制增殖的关键。在田间,毒氟磷是一种对南方水稻黑条矮缩病防治效果比较好的药物。因此研究毒氟磷与SRBSDV P9-1的相互作用及结合方式,可以为新型高效的抗病毒药物的研制打下一定基础。本研究以水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarf virus,RBSDV)P9-1基质蛋白的晶体结构为模板,通过计算机模拟出SRBSDV P9-1的晶体结构,采用计算机分子对接计算出毒氟磷与SRBSDV P9-1的结合位点,通过定点突变PCR法对野生型SRBSDV P9-1质粒进行突变,利用原核表达获取野生型和突变型的SRBSDV P9-1,最终通过荧光光谱法、等温滴定量热法、微量热泳动法来研究药物与蛋白的结合力。实验结果表明:利用定点突变PCR法成功获得突变质粒,通过三种方法的研究结果表明,将P9-1的175位Arg突变后,其与毒氟磷的结合力弱于野生型与毒氟磷的结合力,实验所得结果与计算机模拟结果一致,说明SRBSDV P9-1的175位精氨酸是毒氟磷的关键结合位点。
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