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为了保障全球各国转基因产品标识管理制度的顺利实施,针对转基因水稻检测方法中存在内标准基因检测方法不统一、转基因棉花品系特异性检测方法有待完善等问题,本文开展了相关针对性研究。1.适合转基因水稻定性定量PCR检测的内标准基因的国际协同验证:根据我们已经建立的水稻内标准基因Sucrose Phosphate Synthase (SPS)定性定量PCR检测体系,优化定性定量PCR引物、探针浓度、序列和荧光标记位点,建立了稳定高效的SPS定性和定量PCR检测系统,并组织开展了在国际间实验室内标准基因检测方法的验证,该国际协同实验邀请国内外7个国家12个实验室分别对水稻内标准基因SPS进行验证。结果表明,SPS基因符合转基因产品检测需要的内标准基因的三个特征,即种间特异性,种内非特异性和恒定的低拷贝数。协同实验验证SPS定性PCR检测方法的检测下限能够到达0.1%。定量PCR检测方法的检测下限和定量下限至少为23个拷贝,并且具有良好的反应效率和线性相关系数。采用SPS定量PCR方法对8个水稻盲样分析的偏差在5.22%到26.52%之间。因此说明SPS适合作为水稻的内标准基因,适合用于对转基因水稻样品进行定性和定量PCR检测。2.根据我国已经批准商业化的转基因棉花Mon15985的5’端旁侧序列和正在批准商业化中的转基因棉花Mon88913的3’端旁侧序列,设计引物和探针,通过优化定性定量PCR检测方法的引物探针浓度,PCR检测体系,建立了转基因棉花Mon15985和Mon88913的品系特异性定性和定量PCR检测方法,结果证明了这两种转基因棉花品系特异性定性PCR检测方法具有高特异性,灵敏度达到0.05%,定量PCR检测方法的检测下限和定量下限分别约10和17个拷贝。在此基础上,我们在实验室内部组织了5人的协同实验验证,结果表明这两种转基因棉花的品系特异性定量PCR检测方法具有高PCR扩增效率,高线性相关系数的特点。并且对5个浓度梯度的转基因棉花混合样品的定量检测结果与其实际结果的偏差在25%范围内。结果表明所建立的两种转基因棉花品系特异性PCR检测方法完全适用于这两种转基因棉花及其衍生物的鉴定和定量分析。另外,我们根据已报道的两种转基因棉花Mon1445和Mon531的品系特异性检测方法和本研究建立的Mon15985和Mon88913品系特异性检测方法,建立四种转基因棉花(Mon88913,Mon15985,Mon1445和Mon531)复合品系特异性定性PCR检测方法。该复合定性PCR检测方法在转基因棉花检测中具有高特异性和低的检测下限(0.1%)等优点,提高了转基因棉花定性检测方法的效率。这些对于转基因产品标识管理制度的顺利实施提供了技术支撑。