红景天是一种多年生草本或亚灌木植物,属于景天科、红景天属。红景天苷作为红景天的主要活性成分,其主要药理作用包括抗衰老、抗疲劳、抗缺氧、抗肿瘤和抗辐射;另外,红景天苷对机体的免疫系统也有调节作用,对血管具有一定的保护作用。然而,红景天苷的作用范围不集中,存在生物利用度低的缺点,造成红景天苷的临床用量偏大。脂质体是由磷脂等材料合成的一种双层膜小囊泡,具有生物降解性、生物相容性、低毒性等特点,能够包封脂溶性和水溶性药物。由于脂质体可以提高药物的药理作用,并且与细胞膜具有良好的亲和性,脂质体已经成为非常有价值的药物递送系统。作为一种免疫佐剂,脂质体佐剂有其自身的特点和优势,这主要包括脂质体佐剂可改变机体免疫反应类型、安全性好、无毒副作用、具有靶向性和提高药物的稳定性。本研究针对红景天苷能够增强动物机体的免疫功能展开研究,以脂质体为药物递送系统,选用反复冻融法把猪圆环病毒2型抗原包被到脂质体中,然后再通过硫酸铵梯度法把红景天苷也包被到脂质体中,制得猪圆环病毒2型红景天苷脂质体疫苗。通过以小鼠为模型的动物实验,对脂质体佐剂的免疫效果进行研究,以期为研发新一代猪圆环病毒疫苗提供新的研究思路和方法。本试验分为以下几个部分:试验I红景天苷脂质体的制备工艺研究本章试验的主要目的是制备高包封率的红景天苷脂质体。试验以磷脂、胆固醇、红景天苷等为主要材料,选用硫酸铵梯度法制备红景天苷脂质体。通过单因素试验的方法,以包封率和载药量为试验指标,从红景天苷浓度、载药温度、乙醇注入速度、乙醇注入体积、膜材比和硫酸铵浓度六个影响因素中筛选出影响脂质体包封率的主要因素,即硫酸铵浓度、乙醇注入体积、载药温度和乙醇注入速度。针对筛选出的主要因素,选用响应面法,以包封率为响应值,对红景天苷脂质体的制备工艺进一步优化,得到的实验数据用Design-Expert 7.0软件处理并进行分析,得到最佳的试验条件组合,即硫酸铵浓度为0.26 mol/mL,乙醇体积为6.5 mL,载药温度为43℃,乙醇注入速度为3mL/min,包封率预测值达95.422%。验证试验的结果表明,制得的红景天苷脂质体包封率为94.527士0.682%,与预测值基本一致。试验Ⅱ猪圆环病毒2型红景天苷脂质体灭活疫苗的制备工艺研究本章试验的主要目的是在高红景天苷包封率脂质体的基础上,制备出高抗原包封率的猪圆环病毒2型红景天苷脂质体疫苗。本章采用正交试验方法设计实验,并同时结合反复冻融法与冷冻干燥法两种脂质体制备方法,筛选出制备抗原高包封率的猪圆环病毒2型红景天苷脂质体疫苗的条件,并对其形态结构、粒径分布、包封率等特性进行检测。试验结果表明,当脂质体与抗原体积比为6:1时,采用反复冻融法可制得包封率为85%的猪圆环病毒2型红景天苷脂质体疫苗。透射电镜观察脂质体形态结构为近似圆形的囊泡;马尔文粒径分析仪测定脂质体粒径大小在171 nm左右,并且粒径分散系数小,均一性较好。试验Ⅲ猪国环病毒2型红景天苷脂质体灭活疫苗的免疫活性研究本章的试验目的是制备不同浓度的猪圆环病毒2型红景天苷脂质体疫苗,并研究红景天苷脂质体作为佐剂及其浓度对增强机体免疫应答的影响。按照第三章中的方法,制备三种不同浓度的猪圆环病毒2型红景天苷脂质体疫苗,检测其形态、粒径和包封率等特性,进行以脂质体稳定性为指标的体外缓释试验。以小鼠为动物模型进行动物试验,测定免疫后小鼠血清中抗PCV-2抗体的水平,分析数据。试验结果表明红景天苷脂质体作为佐剂可以显著增强猪圆环病毒2型抗原在小鼠体内的免疫应答,并且低浓度疫苗的效果最明显。