【摘 要】
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目的:通过体外试验研究sCD40L（可溶性CD40配体）对白血病Jurkat细胞株增殖、凋亡的影响,为sCD40L是否可应用于白血病的临床治疗提供实验依据。方法:（1）通过使用CCK8法检测不同浓度的sCD40L对体外培养的Jurkat细胞（急性T淋巴细胞白血病细胞）增殖抑制率的影响,同时确定后续的最佳实验浓度;（2）使用流式细胞术（Annexin V-FITC/PI双染法）,检测最佳实验浓度的s
【基金项目】
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贵州省科技厅联合基金（编号:黔科合LH字[2015]7468号）
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目的:通过体外试验研究sCD40L（可溶性CD40配体）对白血病Jurkat细胞株增殖、凋亡的影响,为sCD40L是否可应用于白血病的临床治疗提供实验依据。方法:（1）通过使用CCK8法检测不同浓度的sCD40L对体外培养的Jurkat细胞（急性T淋巴细胞白血病细胞）增殖抑制率的影响,同时确定后续的最佳实验浓度;（2）使用流式细胞术（Annexin V-FITC/PI双染法）,检测最佳实验浓度的sCD40L对Jurkat细胞凋亡作用的影响;（3）通过采用实时荧光定量PCR法（RT-PCR）检测sCD40L对Jurkat细胞中凋亡相关基因Bcl-2和Bax m RNA表达量的影响。结果:（1）CCK8法检测增殖结果显示:在同一时间加入不同浓度（1.00μg/ml、2.00μg/ml、3.00μg/ml、4.00μg/ml、5.00μg/ml、6.00μg/ml）的sCD40L,与Jurkat细胞共育24 h、48 h、72 h后都有不同程度的增殖抑制作用,与空白对照组和柔红霉素组（阳性对照组）相比,其增殖抑制率均具有统计学意义（P＜0.05）,其中药物浓度为5.00μg/ml的sCD40L对Jurkat细胞的增殖抑制作用最明显,故选择5.00μg/ml作为后续实验浓度;在相同的药物浓度、不同的作用时间下,sCD40L与Jurakt细胞共育72 h后对Jurkat细胞增殖抑制作用最显著。（2）流式细胞术检测细胞凋亡（Annexin V-FITC/PI双染法）结果显示:药物浓度为5.00μg/ml的sCD40L与Jurkat细胞共育24 h、48 h、72 h后均可见细胞凋亡,与空白对照组凋亡率和柔红霉素组（阳性对照组）凋亡率相比,差异均有统计学意义（P＜0.05）。相同药物浓度、不同作用时间,sCD40L在48 h对Jurkat细胞的凋亡作用最显著。（3）RT-PCR检测结果显示:药物浓度为5.00μg/ml的sCD40L与Jurkat细胞共同作用24 h、48 h及72 h后,与空白对照组相比,其Bcl-2 m RNA的表达量均下降,差异均有统计学意义（P＜0.05）,且在48 h降低程度最显著;与空白对照组相比,Bax m RNA的表达量均升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）,且在48 h上升程度最显著。结论:（1）sCD40L对Jurkat细胞的体外增殖具有抑制作用,可以促进Jurkat细胞的凋亡。（2）sCD40L对Jurkat细胞的体外有一定的抗白血病效应,机制可能与Bcl-2/Bax通路的参与有关。
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