目的：本研究采用自体移植法建立大鼠子宫内膜异位症模型，观察来氟米特作用于大鼠子宫内膜异位症（Endometriosis，EMT）模型的整个影响过程，检测大鼠模型异位灶中激酶转录蛋白（Transcription，p-STAT）和细胞信号转导抑制因子（cell signaling inhibitory factor，SOCS）mRNA表达情况，探讨来氟米特对子宫内膜异位症大鼠模型的作用机制。进一步证实免疫调节剂治疗子宫内膜异位症的策略具有可行性，为子宫内膜异位症的临床治疗提供新的治疗策略和靶点以及实验依据。方法：1SD大鼠子宫内膜异位症模型的建立9周龄雌性、性成熟、未孕、健康SD大鼠40只，体重(200±80)g，由河北省实验动物中心提供（合格证号:1011030），采用自体移植法构建动物模型。该研究符合1983年赫尔辛基宣言的原则，并得到河北医学院伦理委员会的批准，按Vernon等的方法用自体移植法手术建模。术前5天给予每天乙烯雌酚200mg/kg灌胃，通过雌激素催情，使所有大鼠在统一处于动情期时开始造模。在无菌环境下，以浓度为43g/L的水合氯醛300mg/kg腹腔注射麻醉，备皮消毒，腹中线耻骨上1cm处切开约2cm长切口，逐层打开腹壁各层，分离出大鼠的右侧子宫，自远端0.5cm处往近端方向结扎子宫部分血管和需切除的子宫上下端，切取约1.5cm长右侧子宫，去除浆膜外脂肪组织，放入生理盐水中，快速纵向切开子宫腔，切取5mm×5mm的两个片段分别缝于左右两侧腹壁，令其内膜面面向腹壁，剩余的一块送病理确诊为子宫组织。术后连续肌肉注射庆大霉素0.1ml/只，每天1次，共5天，预防感染。术后第5日开始乙烯雌酚每天50mg/kg灌胃，连续5天。目的是促进移植内膜生长，提高成膜率。2模型检测与纳入标准模型建立的第四个星期，二剖腹探查，观察移植病变增长，按常规建模实验方法判断子宫内膜移植成活标准：移植内膜体积增加，形成一个浅红色或暗红色结节状球泡，被结缔组织覆盖，周围有新生血管的形成，质地柔软，薄壁，内有透明液体积聚，囊泡高度超过2毫米，或病理检查证实移植子宫内膜上皮细胞，腺体和间质生长为建模成功。取组织活检标本送病理检查（见图1b）。3实验分组和给药将符合纳入标准的大鼠随机分为四组：空白对照组、来氟米特高、低剂量组及达那唑组。药物组用药量根据《实验动物学》大鼠换算标准“每200g大鼠给药剂量为60kg成人药物剂量的0.018倍”换算得出。空白对照组无药物治疗，仅每天灌胃给予同体积0.15%羧甲基纤维素水，治疗组来氟米特高剂量组、低剂量组分别按每天35mg/kg和10mg/kg灌胃给予含来氟米特的0.15%羧甲基纤维素水2ml，共3周；达那唑组按每天25mg/kg灌胃给予含达那唑的0.15%羧甲基纤维素水2ml，共3周。4指标检测方法4.1测量异位灶体积二次剖腹时游标卡尺测量异位结节长、宽、高，根据公式(体积V=0.52×长cm×宽cm×高cm)计算异位灶体积,记作V1。用药3周后再次开腹测量异位灶体积记作V2。同时取异位灶组织分别放于PE管中放入液氮罐中保存，以备后面蛋白检测和mRNA检测。4.2p-STAT蛋白检测取大约500-600mgPE管中异位组织加1ml提取液匀浆提取，4℃12000r/min离心5min，取上清，加入等体积2χSDS上样缓冲液，100℃中煮沸5min。（如果目的蛋白含量小于Western检测的敏感度，可将上清液进行冷冻干燥浓缩）。进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，每孔上样等量总蛋白。利用水浴式电印迹法将蛋白转移至膜上。室温振荡封闭膜2h后，加入1:250（封闭液稀释）的第一抗体，室温缓慢摇荡2h，用PBS-Tween洗膜3次后，再加入1:5000（封闭液稀释）的HRP标记的第二抗体，室温振摇1h，PBS-Tween充分洗膜后，将膜浸入DAB显色液中，室温充分显色后，立即用蒸馏水洗膜，然后将膜转入PBS中观察、照相。密度扫描仪扫描胶片，以β-Actin蛋白灰度值为内参照，行半定量分析。4.3细胞信号传导抑制因子(SOCS)-1mRNA检测Tirol法提取总mRNA后，测定核酸浓度及纯度(OD260:OD280>1.8)，取等量mRNA进行逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)，SOCS上下游引物为：5′-CGCTCCCACTCTGATTACCG-3′和5′-CGAAGCCATCTTCACGCTGA-3′，扩增片段为189bp，反应条件：预变性94℃3min，94℃35s，60℃35s，72℃35s，36个循环，以磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)为内参照校正，行半定量分析。5统计学分析方法计量数据采用均数±标准差（X±S)表示，两样本的比较采用t检验，多样本资料采用完全随机设计方差分析，组间均值两两比较用Students-Newman-Keuls(SNK)法，SPSS17.0软件进行分析，P<0.05为差异有统计学意义。结果：1实验动物一般情况：共建模成功32只大鼠，病理检查证实移植物中均有子宫内膜上皮细胞、腺体和间质的生长见Figure1b，建模成功的异位灶大体标本见Figure1a。在喂药期间，对照组死亡1只，死因为切口感染；治疗组死亡2只，死因为肠梗阻感染。其余未形成典型异位灶淘汰。成膜率80%（32/40）。2来氟米特对大鼠子宫内膜异位灶的影响：治疗前各组异位内膜体积差异均无显著性(F=3.78，P>0.05)，治疗疗后各药物组异位内膜体积均有不同程度得缩小，内膜囊泡液减少或者消失。空白对照组体积明显增大、血管丰富，来氟米特高剂量组和低剂量组以及达那唑组大鼠子宫内膜异位灶体积则缩小，四组大鼠子宫内膜异位灶体积变化用药前后比较分析，各组用药前后体积差值之间有差别（F=25.689，P<0.001)。组间比较来氟米特高剂量组体积明显缩小，成功地抑制了异位灶生长，高剂量组与达那唑组比较无统计学差异，说明高剂量组和达那唑组的疗效相当，但是来氟米特对性激素轴无影响，不影响受孕，因此优于达那唑组。3p-STAT1蛋白的表达（Western blot）：对照组和治疗组在分子量10～50kDa处均出现阳性黑色条带，代表p-STAT蛋白。空白对照组p-STAT蛋白表达明显升高(1.060±0.028)其余各组均有所下降。经单因素方差分析，各组间有差别(F=131.041，P<0.001)。组间两两比较各药物组与空白对照组比较蛋白表达显著下降，差异有统计学意义(P<0.05)，说明来氟米特可以抑制p-STAT-1蛋白的表达。来氟米特高剂量组对蛋白表达的抑制作用最显著，来氟米特低剂量组和达那唑组比较差异无统计学意义，两者对p-STAT蛋白抑制作用一样。4SOCSmRNA的表达：空白对照组SOCSmRNA表达明显升高(0.656±0.017)，其余各组表达均下降。来氟米特高剂量组和低剂量组分别为(0.264±0.016)和（0.552±0.034），达那唑组（0.444±0.023）。经单因素方差分析，各组间差异有统计学意义(F=404.523，P<0.001)。组间两两比较各药物组与空白对照组比较SOCSmRNA表达显著下降，差异有统计学意义(P<0.5)，说明各用药组均可以抑制SOCSmRNA表达，但是来氟米特高剂量组作用最明显。结论：1非动情期自体子宫移植法建立大鼠子宫内膜异位症模型具有可行性。2来氟米特对大鼠子宫内膜异位症具有抑制作用，可以显著抑制异位内膜SOCSmRNA和p-STAT蛋白表达，并能显著抑制异位灶生长的作用。与来氟米特低剂量组比较，来氟米特高剂量组对子宫内膜异位症大鼠的作用比较明显。3.来氟米特的作用机制之一是阻断JAK/STAT通路从而抑制大鼠病灶的形成和发展