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研究背景:弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)是非霍奇金淋巴瘤(NHL)中最常见类型,约占全部NHL患者的30%-40%。在临床症状、免疫分型、组织形态学及遗传分子学均具有较强异质性,目前临床的方案是R-CHOP标准治疗方案,仍有30%-40%的患者出现原发耐药或治疗后复发,疾病进展快,预后差。5年生存期为60%-70%。因此,该病目前仍是不可治愈的恶性疾病,肿瘤的发生发展涉及多基因表达异常及转录后调控异常,目前针对基因在DLBCL发生发展中的作用及靶向药物治疗已初见成效,因此,为了进一步研究DLBCL,发现其致病机制,为DLBCL的临床治疗提供个性化治疗方案尤为重要。研究目的:(1)通过筛查弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)有关的芯片、测序数据,分析差异基因,为寻找DLBCL靶基因提供理论依据。(2)选定差异基因NUP88,通过免疫组化方法检测其在DLBCL的表达情况,分析其临床病理特征的关系及意义。(3)研究NUP88抑制剂藤黄酸对DLBCL细胞系的生物学行为影响,以期寻找潜在的可用于干预DLBCL发生发展或治疗的药物。研究方法:(1)通过筛查所有高通量数据、挖掘TCGA数据库及GTEx数据库进行差异基因重计算获取DLBCL基因表达谱数据和差异表达基因,完成有关潜在靶基因的功能和通路富集分析和蛋白之间相互作用网络(PPI),探讨DLBCL可能存在的分子机制。(2)采用免疫组化方法检测NUP88在84例DLBCL蜡块组织及33例反应性增生的淋巴结组织中的表达,分析NUP88表达与DLBCL患者临床病理参数间的关系及意义。(3)体外实验NUP88抑制剂藤黄酸作用DLBCL细胞株,以OCI-LY10、SU-DHL-4、HMy2.CIR细胞株为研究对象,利用qRT-PCR方法检测细胞株中NUP88的表达量,CCK8、EdU法观察细胞株在抑制剂作用中增殖活性的影响。研究结果:(1)通过挖掘GEO芯片(包含145个DLBCL样本及56个对照)及TCGA(包含47个DLBCL样本)和GTEx(包含337个对照)数据库分别获取DLBCL差异表达基因,二者基因取交集后显示存在816个共同差异基因。对816个交集基因进行GO分析及KEGG分析提示差异基因主要富集多个通路,其中包括RNA转运、核糖体、mRNA监测途径、RNA聚合酶、细胞周期等通路。其中RNA转运通路有明显显著性,富集于这条通路的DLBCL差异基因共有23个,同时通过构建PPI蛋白互作网络,挑选出NUP88作为目的基因。(2)免疫组化检测NUP88在84例DLBCL组织中阳性表达率为73.8%,在33例反应性淋巴结组织中阳性表达率为45.5%。NUP88在DLBCL中的表达明显高于及对照组织的表达,差异有统计学意义(P<0.05),进一步分析NUP88与DLBCL病理参数的关系,其中NUP88与肿瘤分型差异有统计学意义(P<0.05),与患者年龄、性别、Ann Aobor分期、肿瘤大小、结外受累及P受累数、ECOG评分、IPI评分、B症状、血清乳酸脱氢酶、血红蛋白、白蛋白水平的表达之间差异无统计学意义(均为P>0.05)。(3)qRT-PCR方法检测细胞株中NUP88的表达量,与正常B细胞HMy2.CIR相比,NUP88在DLBCL细胞株OCI-LY10中高表达,差异有统计学意义(P<0.05),而在SU-DHL-4中的表达差异无统计学意义(P>0.05)。其次,利用CCK8、EdU法检测藤黄酸对细胞株增殖能力的影响,结果提示藤黄酸作用下,与HMy2.CIR正常B细胞株相比,OCI-LY10、SU-DHL-4淋巴瘤细胞株增殖能力受到抑制。不同浓度藤黄酸处理后,NUP88表达在OCI-LY10、SU-DHL-4中均表达降低。研究结论:(1)利用计算生物学方法能有效的对公共数据库中的DLBCL基因表达谱数据进行筛选和分析,从而获得差异表达基因,为DLBCL的分子机制研究提供理论依据。(2)NUP88基因在DLBCL组织中高表达,可能在促进了DLBCL的发生发展中发挥促进作用,且可能有一定的预后价值。尽管NUP88的表达与各临床病理特征之间无明显关系,其潜在价值还需进一步的探索及大规模临床验证。(3)NUP88抑制剂藤黄酸对DLBCL细胞株的增殖有抑制作用。有可能成为DLBCL患者的新的潜在治疗药物,为下一步进行动物实验和临床试验等方面的研究提供线索和理论依据。