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非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)，是由非酒精的其他损肝因素或者极度脂肪沉积引发的肝脏疾病，会导致肝细胞脂肪变性。目前认为，氧化应激和自噬参与了包括NAFLD在内的多种营养代谢病的发生发展，其中核转录因子红细胞系-2p45(NF-E2)相关因子一2(nuclear factor erythroid-2p45-related factor2，Nrf2)在抗氧化应激体系中起到重要的作用，它的适度激活和核转移，能够调节氧化应激损伤，常被作为潜在的治疗肝性疾病的靶标。自噬是机体的自我保护反应，能吞噬机体内的代谢废物或者累积的有毒内源性物质。有许多研究证明，天然小分子化合物可以激活Nrf2，进而缓解疾病造成的损伤和病理变化。紫檀芪(Pterostilbene，PTE)，是一种广泛存在于蓝莓、葡萄、花榈木等植物中的活性物质，具有多种生物学效应，例如抗炎、抗肿瘤、抗认知障碍等。因此，探究PTE是否通过Nrf2对NAFLD起到保护作用，以及其涉及的分子作用机制是十分重要的。
在本研究中，首先应用了油酸(OA)和棕榈酸(PA)两种游离脂肪酸诱导HepG2细胞建立体外细胞脂肪蓄积模型，应用PTE预处理该模型后，通过CCK-8、油红O染色、Western blot、免疫荧光、mRFP-GFP-LC3腺病毒转染实时观察自噬流、CRISPR/Cas9敲除等实验手段，从细胞和分子水平研究涉及的机制，深入探究PTE对脂肪累积引起的氧化应激和自噬的作用。结果表明：低浓度的PTE对HepG2细胞无细胞毒性；在OA和PA诱导的HepG2细胞内存在大量的脂肪堆积，PTE预处理有效地减少了细胞内的脂肪含量；PTE能明显地增强细胞内Nrf2、PPARa和HO-1的表达，促进Nrf2由细胞质向细胞核的迁移；增强AMPKa活性，抑制mTORCI、S6、S6K以及在调节脂肪合成中起到关键作用的SREBP-Ic，激活PI3K和ATG家族蛋白，促进LC3I向LC3Ⅱ的转化，促进了自噬，减轻了脂肪沉积。但在Nrf2_，-细胞中，PTE激活AMPK的作用被明显削弱，对mTORC和SREBP-1c的抑制作用和对PI3K的促进作用消失，并显著地活化了p62，丧失对脂肪累积和自噬的调节能力。应用PI3K抑制剂3-MA后，PTE对PI3K及其下游蛋白和SREBP-Ic的调控作用消失；应用自噬后期抑制剂BafA1后，PTE
对ATG7和ATG16LⅠ以及LC31与Ⅱ之间转化的作用仍然存在，却促进了p62的表达，加速了自噬溶酶体的降解。
体内研究表明，在泰洛沙泊诱导的野生型小鼠急性NAFLD模型中，PTE能有效地降低血液中甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)、极低密度脂蛋白(VLDL)的含量，提高高密度脂蛋白(HDL)的含量；降低引发氧化应激的活性氧(ROS)、髓过氧化物酶(MPO)含量，提高超氧化物歧化酶(SOD)含量，保护机体免受氧化应激损伤；降低基质金属蛋白酶一9（MMP-9）和血管细胞黏附分子一1(VCAM-1)的含量，减缓血液对血管壁的黏附性；减轻肝脏细胞内的脂肪累积和炎症病变；促进肝细胞核内Nrf2的表达，促进AMPK、ACC和AKT的磷酸化，促进脂肪酸氧化；抑制P-mTORC1、P-S6K、P-S6和SREBP-Ic的活性，促进ATG家族各关键蛋白的表达，抑制脂肪合成，促进自噬。在Nrf2-／-小鼠体内，PTE对甘油三酯运输载体VLDL和能促进胆固醇代谢的HDL的调控作用消失，各组的血脂水平均高于WT型小鼠；PTE对MPO、ROS的抑制作用和对SOD的升高作用消失，使机体基本丧失抗氧化应激能力；抑制了AMPKα、和AKT的活化，进而影响对PI3K、mTORC的作用；诱导P62的表达，促进自噬溶酶体的分解，抑制自噬，与体外结果相一致。
综上所述，本研究通过体内和体外实验两部分，首次阐明了紫檀芪在非酒精性脂肪肝中的作用及其分子机制。在游离脂肪酸诱导的HepG2细胞和泰洛沙泊刺激的C57BL/6小鼠中，PTE通过靶向Nrf2影响AMPK，并通过抑制mTORC通路、增强ATG蛋白活性，激活自噬，有效地缓解了肝细胞内过度脂肪蓄积诱发的氧化应激损伤，促进脂肪酸的代谢与分解，改善NAFLD。综上所述，本研究通过体内和体外实验两部分，首次阐明了紫檀芪在非酒精性脂肪肝中的作用及其分子机制。在游离脂肪酸诱导的HepG2细胞和泰洛沙泊刺激的C57BL/6小鼠中，PTE通过靶向Nrf2影响AMPK，并通过抑制mTORC通路、增强ATG蛋白活性，激活自噬，有效地缓解了肝细胞内过度脂肪蓄积诱发的氧化应激损伤，促进脂肪酸的代谢与分解，改善NAFLD。
在本研究中，首先应用了油酸(OA)和棕榈酸(PA)两种游离脂肪酸诱导HepG2细胞建立体外细胞脂肪蓄积模型，应用PTE预处理该模型后，通过CCK-8、油红O染色、Western blot、免疫荧光、mRFP-GFP-LC3腺病毒转染实时观察自噬流、CRISPR/Cas9敲除等实验手段，从细胞和分子水平研究涉及的机制，深入探究PTE对脂肪累积引起的氧化应激和自噬的作用。结果表明：低浓度的PTE对HepG2细胞无细胞毒性；在OA和PA诱导的HepG2细胞内存在大量的脂肪堆积，PTE预处理有效地减少了细胞内的脂肪含量；PTE能明显地增强细胞内Nrf2、PPARa和HO-1的表达，促进Nrf2由细胞质向细胞核的迁移；增强AMPKa活性，抑制mTORCI、S6、S6K以及在调节脂肪合成中起到关键作用的SREBP-Ic，激活PI3K和ATG家族蛋白，促进LC3I向LC3Ⅱ的转化，促进了自噬，减轻了脂肪沉积。但在Nrf2_，-细胞中，PTE激活AMPK的作用被明显削弱，对mTORC和SREBP-1c的抑制作用和对PI3K的促进作用消失，并显著地活化了p62，丧失对脂肪累积和自噬的调节能力。应用PI3K抑制剂3-MA后，PTE对PI3K及其下游蛋白和SREBP-Ic的调控作用消失；应用自噬后期抑制剂BafA1后，PTE
对ATG7和ATG16LⅠ以及LC31与Ⅱ之间转化的作用仍然存在，却促进了p62的表达，加速了自噬溶酶体的降解。
体内研究表明，在泰洛沙泊诱导的野生型小鼠急性NAFLD模型中，PTE能有效地降低血液中甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)、极低密度脂蛋白(VLDL)的含量，提高高密度脂蛋白(HDL)的含量；降低引发氧化应激的活性氧(ROS)、髓过氧化物酶(MPO)含量，提高超氧化物歧化酶(SOD)含量，保护机体免受氧化应激损伤；降低基质金属蛋白酶一9（MMP-9）和血管细胞黏附分子一1(VCAM-1)的含量，减缓血液对血管壁的黏附性；减轻肝脏细胞内的脂肪累积和炎症病变；促进肝细胞核内Nrf2的表达，促进AMPK、ACC和AKT的磷酸化，促进脂肪酸氧化；抑制P-mTORC1、P-S6K、P-S6和SREBP-Ic的活性，促进ATG家族各关键蛋白的表达，抑制脂肪合成，促进自噬。在Nrf2-／-小鼠体内，PTE对甘油三酯运输载体VLDL和能促进胆固醇代谢的HDL的调控作用消失，各组的血脂水平均高于WT型小鼠；PTE对MPO、ROS的抑制作用和对SOD的升高作用消失，使机体基本丧失抗氧化应激能力；抑制了AMPKα、和AKT的活化，进而影响对PI3K、mTORC的作用；诱导P62的表达，促进自噬溶酶体的分解，抑制自噬，与体外结果相一致。
综上所述，本研究通过体内和体外实验两部分，首次阐明了紫檀芪在非酒精性脂肪肝中的作用及其分子机制。在游离脂肪酸诱导的HepG2细胞和泰洛沙泊刺激的C57BL/6小鼠中，PTE通过靶向Nrf2影响AMPK，并通过抑制mTORC通路、增强ATG蛋白活性，激活自噬，有效地缓解了肝细胞内过度脂肪蓄积诱发的氧化应激损伤，促进脂肪酸的代谢与分解，改善NAFLD。综上所述，本研究通过体内和体外实验两部分，首次阐明了紫檀芪在非酒精性脂肪肝中的作用及其分子机制。在游离脂肪酸诱导的HepG2细胞和泰洛沙泊刺激的C57BL/6小鼠中，PTE通过靶向Nrf2影响AMPK，并通过抑制mTORC通路、增强ATG蛋白活性，激活自噬，有效地缓解了肝细胞内过度脂肪蓄积诱发的氧化应激损伤，促进脂肪酸的代谢与分解，改善NAFLD。