论文部分内容阅读
本研究是以羽衣甘蓝(Brassica oleracea var.acephala)和草原龙胆(Eustoma grandiflorum)的自交不亲和系，及黑芥(Brassica nigra)和白菜(Brassica campestris)为试材。利用激光和高压静电场对试材的花粉进行处理，以期克服自交不亲和性和远缘杂交不亲和性。通过对处理后的花粉的表面结构和蛋白酶活性、及其在柱头上的萌发情况的研究，进一步分析激光和高压静电场的生物效应。利用Northern杂交技术和双向电泳技术，检测了经激光和高压静电场处理的花粉，在授粉后柱头上SLG和SRK基因表达的差异和蛋白质图谱的差异，以探讨激光和高压静电场对生殖反应的作用机制。通过上述实验得到如下结论： 1、通过适宜剂量的激光和高压静电场处理，羽衣甘蓝和草原龙胆的花粉萌发率提高，自交亲和指数和结籽率提高；同时自交后代植株的生长势也有较大改善，幼苗健壮，测定植株的生物量也显著提高。 2、从花粉的表面结构的电镜显微观察分析，通过激光和高压静电场处理后的花粉，其花粉壁的雕纹受到了伤害，网脊线有些断裂，网眼变大，花粉管原始体变长，并且成熟花药的水溶性总蛋白，α-淀粉酶活力，总淀粉酶活力均不同程度的提高。 3、经激光和高压静电场处理的花粉自交后，取不同时间间隔的柱头样品提取总RNA，利用Northern杂交技术对SLG和SRK基因的表达量进行检测。结果表明，授粉后8小时，激光和高压静电场处理与对照之间SLG和SRK基因的表达量无明显差异。授粉后24小时激光处理的SLG和SRK基因的表达量比对照明显降低，但高压静电场处理与对照无明显差异。 4、未授粉柱头的蛋白质点明显多于授粉后柱头的蛋白质点；授粉后一些碱性端的蛋白点消失，同时一些小分子量的蛋白点减少。用激光处理后的花粉与对照花粉在授粉后8和24小时进行比较，在处理与对照之间找到了特异蛋白点。