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本研究对课题组海洋红树林真菌菌种保藏库中的93株初筛有活性的真菌进行了复筛,其中有32株具有活性。实验中利用了传统形态学分类和现代分子生物学手段相结合,对这32株红树林真菌进行了详细的分类鉴定,并做了聚酮合酶基因的初步研究。同时对中国海洋大学5株海洋活性真菌菌株和暨南大学1株海洋活性真菌菌株进行了分类鉴定。
考察了38株真菌在0%、3.3%、6%、10%、15%和20%等6个不同盐度条件下的生长情况,这38株菌在零盐度(0%)时和10%高盐情况下均可生长,说明这38株海洋真菌具有一定的耐盐能力,可能是适应了海洋环境的兼性海洋真菌。
38株真菌中,菌株092008等35株菌(095618、092003、095245、095609、095623、080136、081232、091701、095615、095102、095882、095006、095007、095627、092310、093503、095407、094301、093102、091104、084243、096005、091402、090209、095806、085241、050994、082331、095827、B-57、ZWM-01、ZWM-02、ZWM-08、97F47)鉴定到种水平,菌株090104、095902、JP-1等3株真菌鉴定到属水平。其中菌株090104菌落形态复杂,呈现多种颜色,在形态学和分子生物鉴定结果差异大,很可能是一个变种或者新种。
己鉴定的38株真菌归属为7个不同的属和19个不同的种,其中曲霉属中有Aspergillusflavus,Aspergillusfumigatus,Aspergillusoryzae,Aspergilluscandidus等4个种,青霉属中有Penicilliumcommune,Penicilliumexpansum,Penicilliumcamemberti、Penicilliumoxalicum,Penicilliumcaseicolum,Penicilliumcitrinum,Penicilliumdigitatum.Penicilliumfreguentans,Penicilliusmchrysogenum,Penicilliumgriseofulvum等10个种,还有Acremoniumstrictum,Trichodermaviride,Paecilomyces,Myceliasterilia、Wallemiasebi等5个种属。
复筛过程中,发现菌株092008和菌株095618具有很强的抗MRSA活性,活性能稳定遗传,具有良好的开发前景。
在这38株活性菌株聚酮合酶基因研究中,仅从菌株095618、菌株092008中,得到聚酮合酶基因的保守序列,在NCBI比对分析后,得出菌株092008中聚酮合酶基因可能与真菌毒素的产生有关,而菌株095618中聚酮合酶基因与AspergillusoryzaeRIB40基因组DNA的部分序列相似。