ELISA检测糖皮质激素受体α对预测多发性硬化患者激素反应性价值的研究

来源 :首都医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xxk2010
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目的:  应用ELISA法检测多发性硬化(multiple sclerosis,MS)患者激素冲击治疗前后外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中的糖皮质激素受体α(Glucocorticoid receptorα,GRα),分析GRα的变化及其与EDSS评分和激素体外敏感性的关系,从而探讨酶联免疫吸附测定法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测GRα是否具有预测MS患者激素疗效的价值。  方法:  1.研究对象:2012年1月~2014年1月天坛医院神经内科复发-缓解型MS的急性期住院患者,共19例,其中男8例,女11例,年龄在18岁-60岁之间,均符合McDonald(2010)诊断标准,EDSS评分升高至少1分。患者发病前1个月未使用激素,发病前3个月未使用免疫抑制剂和干扰素治疗。对照组19例,均为健康成年人。  2.研究方法:①MS患者于复发急性期(发病后30天内)给予激素冲击治疗(治疗方案:甲强龙500mg i.v.gtt5日;250mg i.v.gtt3日;120mg i.v.gtt3日;波尼松片60mg p.o,每周减量10mg。同时给予维生素B1、维生素B12、抑酸、补钾、补钙等辅助治疗)②MS患者于激素冲击治疗前和治疗后第7在清晨7:00-9:00抽取静脉血5mL,对照组抽血时间同样为清晨7:00-9:00。血样分为两份,一份血样2mL经Fico(ll)密度梯度离心法获得PBMC并计数,将细胞浓度调整至1*106细胞/mL,取1mL超声震碎PBMC后,使用ELISA试剂盒检测GRα,单位是ng/mL,故平均GRα浓度单位换算为ng/106细胞;③于激素治疗前和治疗后28天进行EDSS评分,EDSS评分治疗后减少至少1分定义为治疗有效;④另一份3mL的血样加入脂多糖和不同浓度的地塞米松后培养24小时,检测上清液中的白介素6(IL-6)浓度,单位是ng/mL,根据各个特定浓度的地塞米松对IL-6的抑制率,计算使IL-6浓度下降50%的地塞米松浓度(即IC50),从而得出激素体外敏感性;⑤所有的数据分析均采用SPSS17.0数据分析软件中T检验等方法完成数据处理及统计分析,相关研究采用相关分析,以P<0.05作为有显著意义的标准。  结果:  1.MS患者平均GRα浓度(96.42±68.36ng/106细胞)低于对照组平均GRα浓度(506.58±495.58ng/106细胞)(P=0.02),差异具有统计学意义;MS患者IC50(1.73×10-8±2.49×10-8M)与对照组IC50(5.37×10-10±4.48×10-10M)无明显差异(P=0.126),不具有统计学意义。2.MS治疗有效组治疗前平均GRα浓度(131.94±76.28ng/106细胞)高于MS治疗无效组(56.98±25.28ng/106细胞)(P=0.013),治疗有效组激素治疗后平均GRα浓度变化(748.31±642.12ng/106细胞)大于治疗无效组(102.97±88.11ng/106细胞)(P=0.01),治疗有效组IC50(2.89×10-9±3.92×10-9M)显著低于治疗无效组(5.31×10-8±6.92×10-8M)(P=0.001),差异具有统计学意义。3).治疗前平均GRα浓度与IC50呈负相关(P=0.022,Pearson相关系数为-0.826),差异具有统计学意义;治疗前平均GRα浓度与EDSS评分变化间不存在线性关系(P=0.074),不具有统计学意义。  结论:  1.ELISA测定GRα在一定程度上能预测MS患者的激素反应性。  2.GRα与激素体外敏感性存在良好的一致性。  3.连续应用糖皮质激素可能造成MS患者GRα表达量下降,进而影响部分患者对激素反应性。  4.ELISA法检测GRα是可行的。
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