二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic acid),即DHA,属n-3系多不饱和脂肪酸(n-3 polyunsaturated fatty acid,n-3 PUFA)。由于含有6个不饱和双键的特殊结构,决定了它对人类健康具有特别的作用和影响。目前市场上的多不饱和脂肪酸产品大多数以微胶囊和油剂的形式为主,生物利用率有待提高。本研究采用高能乳化法中的超声波法制备水包油型微藻DHA油纳米乳,并利用正交实验设计筛选出最佳微藻DHA油纳米乳配方。采用气相色谱法检测微藻DHA油纳米乳的载药量。考察微藻DHA油纳米乳在不同贮藏温度下的物理和化学稳定性。筛选出合适的冻干方法,将微藻DHA油纳米乳冻成乳白色纳米干乳颗粒,提高稳定性并保持物理化学稳定性基本不变。具体研究内容及成果如下:1微藻DHA油纳米乳的制备及其配方的筛选利用高能乳化法中的超声波法以微藻DHA油、表面活性剂和单蒸水为配方制备微藻DHA油纳米乳,通过观察其外观、形态、平均粒径、Zeta电位等理化性质作为评价指标,探究了超声功率、超声时间和表面活性剂与油相体积比(SOR)对微藻DHA油纳米乳制备的影响,并且采用正交实验优化纳米乳制备的工艺参数。筛选出SOR为0.8,超声时间为5min,超声功率为375W时,可得到均一稳定,流动性良好的微藻DHA油纳米乳。2建立DHA分析方法DHA甲酯标准品采用气相色谱法进行方法学验证,主要包括标准曲线、加样回收率、精密度、稳定性和专属性实验。结果表明,DHA在0-2mg/ml内线性关系良好(R2=0.999),加样回收率为103.2%,RSD=3.3%,精密度为1.4%(n=7),稳定性RSD=1.1%,色谱条件对DHA有专属性。实验结果证明该方法的科学性、准确性和稳定性,可以检测微藻DHA油纳米乳的载药量。3微藻DHA油纳米乳的稳定性考察纳米乳是热力学不稳定体系,研究其稳定性对于确定纳米乳配方具有极其重要的意义,微藻DHA油纳米乳的稳定性研究包括物理稳定性和化学稳定性,其中,物理稳定性包括平均粒径、浊度、pH值、Zeta电位,化学稳定性指微藻DHA油的过氧化值,考察的影响因素为光照和温度。以28天为一个周期,考察DHA纳米乳的稳定性。结果显示,28天后,纳米乳的平均粒径、Zeta电位和浊度没有明显变化,温度对pH值和化学稳定性有显著影响,光照影响不大。进一步说明微藻DHA油纳米乳液稳定性良好。4微藻DHA油纳米乳冻干工艺的研究将微藻DHA油纳米乳进行真空冷冻干燥,可以保证其长期稳定性,扩大其应用范围。以筛选出的制备微藻DHA油纳米乳的最优条件制备纳米乳,按照冻干保护剂和油相的质量比为3:1添加冻干保护剂,冻干保护剂采用α-乳糖和甘露醇的混合物,其中,α-乳糖和甘露醇的质量比例为1:1。冻干曲线:预冻温度为-40℃,维持2h;升华干燥第一阶段为-30℃,维持12h,第二阶段为-20℃,维持2.5h;解析干燥为25℃,维持3h。最终,制剂冻干后呈乳白色颗粒状,复溶速度快,复溶后平均粒径仍然在纳米范围内。