本研究利用纳米技术的优点,以纳米乳给药系统为载体,对传统的黄连素制剂进行改造。在建立分析方法、空白纳米乳的处方筛选及影响因素考察上,利用伪三元相图,制备出了黄连素纳米乳给药系统,并对其质量的稳定性、安全性、药效学、药动学和释药性能等进行了较为系统的研究。研究摘要如下:1.黄连素纳米乳给药系统的分析方法建立建立用于黄连素纳米乳给药系统含量检测的紫外(制剂)与高效液相色谱(制剂和动力学)分析方法。用紫外分光光度计和高效液相色谱仪,对其紫外吸收波长、标准曲线、回收率和精密度等进行研究。结果表明,黄连素在340 nm处有最大吸收,紫外的标准曲线在1～40μg/ml范围内线性关系良好,其平均回收率为99.7 %。回收率的相对标准偏差(RSD)为0.39 %、进样重复性的为2.5 %、日间和日内精密度的小于0.6 %;高效液相色谱(HPLC):制剂的标准曲线在50～1600 ng/mL范围内线性关系良好,检测限为2ng/mL,其平均回收率为99.4 %和平均保留时间为7.499 min。回收率的RSD为0.79%、进样重复性的为0.64 %和1.44 %、日间和日内精密度的小于0.6 %;血浆的标准曲线在10～1600 ng/mL范围内,线性关系良好,检测限为0.36 ng/mL,其平均回收率为95.6 %和平均保留时间为5.602 min。回收率的RSD为3.46 %、进样重复性的为0.42 %和1.42 %、日间和日内精密度的小于0.6 %。本研究建立的分析方法回收率高、精密度和重复性好,可用于其质量控制和动力学研究。2.空白纳米乳给药系统的处方筛选及其影响因素考察筛选出空白纳米乳处方并对其影响因素进行考察。用HLB值法和纳米乳的评价标准,筛选出形成纳米乳的处方;用伪三元相图,对纳米乳形成的影响因素进行考察;对黄连素的增溶作用也进行研究。结果表明,筛选出可形成纳米乳的处方是,表面活性剂为Tween类(80和60),Span类(80和60),EL-40和RH-40;助表面活性为无水乙醇、甘油、丙二醇、正丁醇和1,3丁二醇;油相为IPM和液体石蜡。影响因素考察结果显示,表面活性剂与油相的种类及比例是纳米乳形成最主要和关键的因素。在能形成纳米乳范围内,表面活性剂HLB值越大,纳米乳区越大;助表面活性剂的链越短,纳米乳区越大;油相的HLB值与混合表面活性剂的HLB值越匹配,纳米乳区越大;表面活性剂与助表面活性剂的比值(Km)越合适,纳米乳区越大;在一定范围内,药物加入量的增加,纳米乳区增大;增溶试验表明,黄连素在纳米乳中的溶解度比水溶液和胶束的高。本研究筛选出的空白纳米乳处方及影响因素考察结果,为后期制备工作奠定了基础。3.黄连素纳米乳给药系统的制备及其质量评价制备出黄连素纳米乳给药系统并对其质量进行评价。选择适宜的油相、表面活性剂和助表面活性剂,利用伪三元相图,制备出黄连素纳米乳给药系统。用包封率与载药量为评价指标,对其制备工艺进行优化;用透射电镜、激光粒度分布仪、黏度计、折光仪和电导仪等对其理化性质进行研究;用高效液相色谱仪检测该系统中黄连素的含量,对其稳定性进行检测。结果表明,制备出含EL40-甘油-IPM的黄连素纳米乳给药系统是澄清透明的球状液滴液体,其平均粒径为43.5 nm(空白纳米乳为17.9 nm);优化出的制备工艺是磁力搅拌、37 oC、150 r/min、分散12 h和第三种药物加入顺序。理化性质、稳定性参数、加速和光加速等研究结果表明,制备的黄连素纳米乳给药系统质量稳定;通过长期和经典恒温试验可推测出其有效期为2.5年。本研究制备出的黄连素给药系统质量稳定,符合纳米乳给药系统的要求。4.黄连素纳米乳给药系统的安全性评价对黄连素纳米乳给药系统的安全性进行评价。通过急性毒性、皮肤刺激和眼部刺激毒性(单次和多次)、细胞毒性试验对纳米乳的安全性进行评价。结果表明,黄连素纳米乳给药系统对小鼠的最大耐受量为875 mg/kg,折合成人的剂量(50 kg),是临床用量的21 875倍。根据Bliss法,用SAS6.0统计软件、自行编制程序,计算出其累积的LD50为3 055 mg/kg;对家兔皮肤和眼部(单次和多次)刺激均无毒性;对细胞毒性为1级,无明显毒性。本研究制备出的纳米乳给药系统的对小鼠、家兔皮肤和眼部、细胞均无毒性,临床用药安全,符合纳米乳给药系统的要求。5.黄连素纳米乳给药系统的药效学评价对黄连素纳米乳给药系统的药效学进行评价。用体外抑菌、对大肠杆菌所致细菌性腹泻的预防和治疗作用、对正常和高糖耐受量小鼠血糖的影响和对急性高血脂模型小鼠血脂的影响试验对其药效学进行评价。黄连素纳米乳给药系统对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌和无乳链球菌具有相似的抗菌活性,其抑菌圈直径分别是片剂、胶囊和水溶液的4倍、3.83倍、3.83倍和3.66倍。用大肠杆菌所致细菌性腹泻,黄连素纳米乳减少腹泻次数是黄连素水溶液、黄连素片剂、黄连素胶囊和泻痢停的2倍、2.2倍、2倍、1.93倍(预防试验)和2.7倍、2.13倍、1.88倍、2.22倍(治疗试验)。用50 mg/kg,1次/d,连续给药6 d后,它可降低正常小鼠的血糖值,但与各试验组间差异不显著(P>0.05)。用上述方法给药,2.0 g/kg腹腔注射葡萄糖造成的高糖耐受量模型,对降低小鼠相对的血糖值的平均值(0、30、60、120 min),黄连素纳米乳是黄连素片剂、黄连素胶囊和格列苯脲的4.48倍、3.57倍、3.88倍。用上述方法给药后,0.25 mL/10g腹腔注射75%的蛋黄乳造成的急性高血脂模型,对降低小鼠的总甘油三酯、总胆固醇、动脉硬化指数的相对值,黄连素纳米乳是黄连素片剂、黄连素胶囊和非诺倍特的4.51倍、2.18倍、4.60倍和2.08倍、1.06倍、1.27倍和2.64倍、1.64倍和1.44倍。药效学结果表明,制备的黄连素纳米乳药效比黄连素黄连素片剂和黄连素胶囊显著提高。6.黄连素纳米乳给药系统的药动学及其释药性能研究对黄连素纳米乳的药动学和体外释药性能进行研究。给家兔灌50 mg/kg黄连素后,在0、0.16、0.33、0.5、0.75、1、2、4、8、12、18、24 h,用HPLC法测定家兔血浆中的黄连素含量,用残数法对药时曲线进行拟合,计算出药动学参数。用透析袋法,考察黄连素纳米乳、黄连素片剂和黄连素胶囊在人工胃液、人工肠液和pH6.8的磷酸盐缓冲液(PBS)的释药性能,用七种常用的释放模型方程对释药曲线进行拟合。在家兔体内,黄连素纳米乳、黄连素片剂和黄连素胶囊均符合有吸收的二室开放模型。黄连素纳米乳的平均达峰时间Tmax(4.205 h)比黄连素片剂(1.379 h)和黄连素胶囊(1.117 h)延长2.826 h和3.088 h;其理论的平均最高血药浓度Cmax(113.699μg/L)是黄连素片剂(62.466μg/L)和黄连素胶囊(60.021μg/L)的1.820倍和1.894倍;其相对生物利用度是黄连素片剂和黄连素胶囊的339%和332%。释药结果表明,黄连素纳米乳在人工胃液和PBS中符合Hixon-crowell方程;在人工肠液中符合一级释放方程。动力学结果揭示,黄连素纳米乳的相对生物利用度明显增加,且具有一定的缓释作用。释药性能曲线显示,黄连素纳米乳在人工肠液中的释放浓度最高,药物释放属于被动扩散。