论文部分内容阅读
本研究利用RT-PCR和RACE技术,克隆了棉铃虫的EHcDNA全长序列。该序列编码88个氨基酸的前体蛋白,其中包括26个氨基酸的信号肽和62个氨基酸的成熟肽。同源性分析表明棉铃虫EH和其它昆虫中分离的EH具有很高的保守性。Northern杂交和RT-PCR分析都表明EH只在棉铃虫的脑中表达,其它神经组织和非神经组织不表达。RT-PCR结合Southern杂交分析发现,棉铃虫EHmRNA表达呈现规律性变化,在蜕皮前mRNA表达量上升到最高值,蜕皮后逐渐下降。免疫组化和原位杂交结果证明,棉铃虫羽化激素在mRNA水平和蛋白水平上都定位于棉铃虫脑的V型细胞内。此外,免疫组化和Western的结果显示EH释放有两条不同的途径,即为从棉铃虫脑的V型细胞释放到中枢神经节内和释放到棉铃虫血淋巴内在外周神经系统发挥其功能。利用ELISA分析,发现在蜕皮整个过程中,血淋巴内的EH滴度在蜕皮时达到最高值。这些结果与EH触发蜕皮的功能是一致的。RT-PCR的结果还表明,EH在棉铃虫的整个发育过程都有表达,因此除了刺激昆虫蜕皮外,EH可能有其它的生物功能。