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目的:建立高效液相色谱法测定人血浆中吉非贝齐浓度的分析方法,研究琪宝(番禺南沙)制药有限公司研制的吉非贝齐胶囊在人体内的药代动力学和相对生物利用度,为临床合理用药提供必要的试验数据。
方法:高效液相色谱法采用SinoChrom ODS-BP色谱分析柱(150mm×4.6mm,粒径5μm),流动相为甲醇-乙腈-0.2％磷酸溶液(20:55:25,v/v/v),检测波长为225nm,流速为1.0mL·min-1,以布洛芬做内标。对分析方法的专属性、标准曲线和定量范围、定量下限、精密度与准确度、样品稳定性、提取回收率等进行了充分确证。
以已上市的吉非贝齐胶囊(乐衡)为参比制剂,采用两制剂单剂量双周期交叉给药试验设计。将20名健康志愿受试者随机分成2组,先后单剂量口服受试制剂或参比制剂0.6g后,抽取服药后不同时间前臂静脉血,用高效液相色谱法测定血浆药物浓度,绘制血药浓度.时间曲线。采用3P97实用药代动力学计算程序对数据进行处理,求算药物动力学参数,计算受试制剂的相对生物利用度。以双单侧t检验进行生物等效性判定,比较两种制剂的人体药代动力学参数有无差异,评价两制剂在人体的生物等效性。
结果:
1分析方法确证
1.1方法专属性
布洛芬保留时间为4.6min,吉非贝齐保留时间为6.1min；血浆中内源性物质、内标布洛芬及吉非贝齐分别在不同时间出现吸收峰,分离较好。
1.2标准曲线的制备
计算求得直线回归方程为:y=0.1752x-0.0137(r=0.9978)。测定吉非贝齐血浆浓度的线性范围为O.504μg·mL-1～50.36μg·mL-1,定量下限为0.5μg·mL-1。
1.3精密度与准确度
日内精密度在6.82％～11.83％之间,日间精密度在7.79％～9.97％之间,均低于15％；准确度在98.97％～102.9％之间,未超过±15％。
1.4稳定性考察
吉非贝齐血浆样品在室温放置8h,血浆样品提取后室温放置24h,血浆样品经冷冻.解冻循环3次以及血浆样品-30℃长期冷冻(24天)等条件下均能保持稳定。
1.5样品提取回收率
吉非贝齐在高、中、低(25.18,5.04,1.01μg·mL-1)三个浓度血浆样品的提取回收率分别为(60.54±2.51)％,(54.60±5.12)％和(64.03±5.32)％,相对应浓度内标布洛芬的提取回收率分别为(68.59±8.90)％,(58.01±5.11)％和(62.71±11.06)％。
2主要药动学参数
受试者口服0.6g吉非贝齐胶囊受试制剂和参比制剂后,血浆中吉非贝齐的Tmax分别为(1.98±0.64)h和(2.05±0.58)h,Cmax分别为(30.89±7.83)μg·mL-1和(30.17±6.07)μg·mL-1,t1/2分别为(1.89±0.52)h和(2.05±0.58)h,AUC0→t分别为(91.96±22.11)和(83.86±17.32)μg·h·mL-1,AUC0→∞分别为(93.48±22.29)和(85.39±17.36)μg·h·mL-1。受试制剂的相对生物利用度为(110.1±17.2)％。
3统计学结果
两制剂的ln(AUC0→∞)和ln(AL/C0→t)在周期间无显著性差异,在制剂间和个体间有显著差异；ln(Cmax)在制剂间和周期间均无显著性差异,在个体间有显著性差异。进一步采取双单侧t检验和(1-2α)置信区间法分析,ln(AUC0→t)和ln(Cmax)均拒绝不等效假设(P<0.05),受试制剂AUC0→t和Cmax的90％置信区间为参比制剂相应参数的102.2％～115.6％和92.5％～111.1％,符合药典规定。
结论:
1方法学确证结果表明,本分析方法能够准确、专一地测定吉非贝齐在血浆中的浓度,提取回收率结果一致、精密,重现性好。本分析方法符合有关要求,可用于药物动力学试验。
2健康志愿者单次口服0.6g吉非贝齐胶囊的药动学研究表明,吉非贝齐体内过程符合口服给药一室开放模型。
3琪宝(番禺南沙)制药有限公司研制的吉非贝齐胶囊与已上市的吉非贝齐胶囊(乐衡)在人体内生物等效。