南抗杨转耐淹基因SublA-1的研究

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南抗杨既是短周期成林的优质工业用材原料,也是优良的林网、林带和城市绿化种。主要分布在京、津、华北、黄河以南以及长江流域和西南地区。杨树的转基因研究始于1986年,20多年来杨树转基因技术迅猛发展,一些目的基因包括抗虫、抗病、抗盐、抗除草剂和降低木质素基因等已被转入杨树。但在抗水淹方面的研究并不完善,将水稻的耐淹基因Sub1A-1转入南抗杨中,对于安徽沿淮地区的植树造林和城市绿化,改善生态坏境具有重要意义。  本研究以水稻的cDNA为模板,采用RT-PCR从水稻FR13A中克隆Sub1A-1基因的序列并构建过量表达载体。优化南抗杨遗传转化体系,并将水稻Sub1A-1基因的过量表达载体导入南抗杨。获得主要结果如下:  (1)从水稻变异体系FR13A中克隆了耐淹基因Sub1A-1,测序结果和NCBI上公布的一致。  (2)通过酶切、纯化、连接、转化等一系列基因工程操作方法构建了过量表达载体pBI121+Sub1A-1。  (3)选用正交实验设计,得到杨树最佳的遗传转化体系。结果表明,外植体预培养2d,AS浓度为100μmol/L、菌液浓度OD值为0.7的农杆菌液中侵染15min,共培养4d为最佳遗传转化体系条件。  (4)对南抗杨进行遗传转化,经过卡那霉素筛选和PCR分子检测获得3株含水稻Sub1A-1基因的杨树苗。
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