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本课题在回顾冠心病中医学理论的基础上,从“心本于肾”理论出发,结合导师治疗冠心病的临床经验,建立补肾活血针法,意在强调肾虚血瘀在冠心病发病中的重要性,并对其治疗冠心病心绞痛的疗效和安全性进行了较系统的临床观察。同时,制作大鼠心肌缺血模型,培养骨髓细胞和外周血细胞,运用流式细胞仪、免疫荧光术、免疫印迹技术等,证实了补肾活血针法具有动员骨髓EPCs、修复内皮的作用,为临床针灸治疗冠心病心绞痛提供一种新的组穴思路。本研究分为临床研究和实验研究两部分,主要研究方法和结果如下:临床研究目的观察补肾活血针法治疗冠心病心绞痛的临床疗效。方法选择冠心病稳定型劳累性心绞痛患者60例,随机单盲分为两组,试验组和对照组各30例,治疗组采用自拟补肾活血针法,针刺肾俞、膈俞、心俞穴为主穴;对照组选用内关穴为主穴。每日一次,治疗4周。结果试验组和对照组心绞痛总有效率分别为90.00%、63.33%;肾虚血瘀、心脉痹阻证治疗前后积分,试验组总有效率为86.67%,对照组总有效率为60%,其差异有显著性(P<0.05);治疗前后中医症状积分,试验组治疗后中医症状积分明显降低,且降低幅度显著大于对照组(P<0.01)。硝酸甘油停减率,试验组减停率93.33%,对照组减停率80.00%,两组比较差异有显著性(P<0.05)。心电图疗效,试验组和对照组总有效率分别为73.33%、50.00%,两组比较差异有显著性(P<0.05)。结论补肾活血针法能够明显缓解心绞痛、消除主要临床症状、减少硝酸甘油用量、改善心电图,是治疗冠心病心绞痛较好的方法之一。目的探讨补肾活血针法动员骨髓EPCs、修复内皮的作用及其机制。方法通过结扎大鼠左冠状动脉前降支复制大鼠心肌梗死模型,随机分为模型组(M组)、观察组(补肾活血针法组)(G组)、对照组(内关组)(D组),另10只正常大鼠作为空白组(K组),共4组。4周后取各组大鼠骨髓及外周血进行EPC的分离培养,培养7天后收集贴壁细胞,运用流式细胞仪进行EPC表型鉴定,免疫印迹法(Western blotting)检测骨髓基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达情况,另外采用酶联免疫吸附法(ELISA)、硝酸还原酶法、比色法等技术检测上清液血管内皮生长因子(VEGF)、基质细胞衍生因子1-a(SDF-1a)、一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)的变化。结果1.EPC表型鉴定:骨髓CD34+/CD133+阳性率,观察组(60.4士5.6%)较模型组(20.5士5.7%)有非常显著提高(P<0.01),且明显高于对照组(28.1士3.4%)(P<0.05);外周血CD34+/CD133+阳性率,观察组(9.5士2.1%)明显高于其他三组(2.3士1.1%、1.4士0.4%、0.8士0.1),差异非常显著(P<0.01)。对照组、模型组与空白组三者两两比较,无显著性差异(P>0.05)。2.骨髓内皮祖细胞MMP-9免疫印迹条带分析表明,观察组骨髓内皮祖细胞MMP-9产生的量较模型组显著增加,且高于对照组(P<0.01);模型组与空白组相比差异无显著性(P>0.05)。3.外周血EPC上清液VEGF、SDF-1a检测结果显示,观察组与对照组均能提高VEGF、SDF-1a含量,且观察组高于对照组,差异有显著性(P<0.01);模型组较空白组无显著性差异(P>0.05)。4.外周血EPC上清液NO、SOD检测结果显示,观察组NO及SOD水平明显增高,差异有显著性(P<0.05),模型组却升显著降低,对照组与模型组及空白组比较,无显著性差异(P>0.05)。结论补肾活血针法能够动员骨髓EPC,经外周血到达受损部位而修复内皮,发挥“自身移植”的作用。其机制可能与缺血心肌中VEGF、SDF-1a表达上调,激活MMP-9信号通路有关。