论文部分内容阅读
生物体内的一些微量物质,包括一些阳离子、阴离子和中性分子,在生物活动的调节过程中起着非常重要的作用。近年来,对于这些物质的检测引起了广泛关注。在各种检测技术中,荧光检测法不仅具有操作简单的特点,而且在灵敏度、选择性、响应时间、实时检测(如荧光成像技术)等方面均具有突出的优势,因而被广泛应用与生物检测领域。荧光碳点(Carbon Dots)作为碳纳米材料家族的新型成员,不仅具有优良的光学性能与小尺寸特性,而且还有良好的生物相容性及低细胞毒性,成为替代量子点的最佳选择。因此,本研究通过对荧光碳点的改性,制备了三种基于碳点的荧光检测体系,分别实现了对碘离子、pH、过氧化氢的选择性荧光检测和/或细胞成像。制备了Cdots-Hg(II)复合物,获得了碘离子的荧光增强型传感器。并采用核磁共振、原子力、红外光谱、紫外-可见光谱、荧光光谱等手段对碳点及基于碳点的检测传感器进行了表征。对于本检测体系,汞离子可以与碳点结合,形成了一种Cdots-Hg(II)复合物,并淬灭了碳点的荧光发射;而碘离子的加入,可以从复合物Cdots-Hg(II)中夺取汞离子形成更加稳定的碘化汞,重新使碳点的荧光恢复,从而实现了对碘离子的荧光检测。该体系可应用于纯水环境和尿液中对碘离子的检测,检测下限为436nM。将荧光素异硫氰酸酯(FITC)衍生物经共价键接枝到碳点表面,构建了一种碳点为基体的pH荧光比率检测体系。所制备的传感器CD-FITC粒径大小为5nm,其中碳点不仅构成了体系的载体,也是能量转移的供体。当环境的pH发生改变时,FITC基团的结构发生改变,引起其光谱学性质的变化,可接受来自供体的激发态能量而成为能量转移的受体,从而实现了对环境pH值的荧光比率检测。该检测体系在范围为4~8对pH具有较高的灵敏性,且pKa为5.69,可用于细胞内pH的检测。我们发现检测体系具有良好的水分散性、稳定的光谱学特性和很低的细胞毒性,也可以在活细胞内对胞内不同区域的pH进行成像。设计合成了一种基于碳点的多功能荧光检测体系,构建了基于FRET原理的比率型、具有线粒体靶向功能的过氧化氢荧光检测体系。在构筑荧光传感体系时,我们依次将靶向基团三苯基膦和过氧化氢探针(PF1)接枝到碳点表面(两者含量分别为4.21mg/g和31.47mg/g)。该检测体系具有很好的水溶性、且对过氧化氢的检测具有很好的选择性和抗干扰性,检测下限达到0.75μM。通过细胞毒性和细胞成像实验,发现该检测体系具有很低的细胞毒性和很好的线粒体靶向作用,并可在活细胞内,对外源性(exogenous)和内源性(endogenous)H2O2进行比率型荧光检测。我们的研究结果表明,作为一种新型的荧光纳米粒子,碳点具有水分散性良好、细胞毒性低、易于表面修饰、光学性质稳定等特点,是一种颇具潜力的生物检测用纳米材料。