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目的:通过研究牙龈卟啉单胞菌提取的牙龈素对大鼠主动脉平滑肌细胞增殖凋亡及炎症因子表达的影响,探讨牙龈素在大鼠主动脉平滑肌细胞增殖中的作用及其机制,为慢性牙周炎与动脉粥样硬化的相关性研究提供理论依据。方法:第一部分:运用丙酮有机沉淀、透析及差速离心法自牙龈卟啉单胞菌W83菌株中分离提取牙龈素混合物,检测其酶活性,测定蛋白浓度;原代培养大鼠主动脉平滑肌细胞,分别以100μg/ml,50μg/ml,25μg/ml,12μg/ml,6μg/ml,3μg/ml,1μg/ml,0μg/ml激活牙龈素干预48小时,CCK-8法检测细胞增殖。确定最佳牙龈素作用浓度后,以5μM、10μM、20μM、40μM精氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Rgp)抑制剂(KYT-1),赖氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Kgp)抑制剂(KYT-36)抑制牙龈素酶活后干预大鼠主动脉平滑肌细胞,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期;免疫组化检测平滑肌细胞收缩型标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白及合成型标志蛋白骨桥蛋白;凋亡试剂盒检测大鼠主动脉平滑肌细胞凋亡情况;ELISA检测大鼠主动脉平滑肌细胞IL-8及TNF-α表达水平,并比较Rgp与Kgp作用差异。第二部分:设计骨桥蛋白siRNA序列,构建骨桥蛋白过表达质粒,转染至大鼠主动脉平滑肌细胞,确定转染效率。流式细胞仪检测细胞周期,realtime PCR检测增殖核抗原mRNA水平、α-平滑肌肌动蛋白及调宁蛋白mRNA水平,Westernblot检测α-平滑肌肌动蛋白及调宁蛋白蛋白水平。第三部分:表达谱基因芯片初筛牙龈素干预大鼠主动脉平滑肌细胞差异表达基因,realtime PCR验证。结果:第一部分:1)成功自牙龈卟啉单胞菌W83菌株中提取分离牙龈素,其Rgp酶活性为280U/L,Kgp酶活性为84U/L;2)牙龈素干预后,大鼠主动脉平滑肌细胞发生增殖,以牙龈素浓度为12μg/ml时增殖最显著(F=42.048,P<0.001),10μM KYT1、KYT36及KYT1+KYT36抑制牙龈素酶活后,大鼠主动脉平滑肌细胞增殖明显降低,抑制其促增殖作用(F=12.109,P<0.001),但各抑制剂之间差异无统计学意义(P>0.05);3)牙龈素影响大鼠主动脉平滑肌细胞细胞周期,G0/G1期细胞数明显减少(25.87±4.58),S期细胞数明显增加(49.90±3.63),促进其由G0/G1期进入S期(P<0.001);4)牙龈素干预后,大鼠主动脉平滑肌细胞骨桥蛋白表达明显增加,发生了表型转化;5)牙龈素干预后,大鼠主动脉平滑肌细胞凋亡率未显著增加,差异无统计学意义(P>0.05);6)牙龈素干预48h后,炎症因子IL-8、TNF-α表达显著增加(IL-8:F=8.241,P=0.0014;TNF-α:F=44.14,P<0.001)。第二部分:1)成功构建骨桥蛋白-siRNA,50μM骨桥蛋白-siRNA F02 24h转染效率最高,转染后骨桥蛋白mRNA水平降低;2)成功构建骨桥蛋白过表达质粒,转染效率为60%,转染后骨桥蛋白mRNA水平显著增加;3)骨桥蛋白-siRNA转染后,大鼠主动脉平滑肌细胞细胞周期阻滞于G0/G1期,G0/G1期细胞数显著增加(55.43±1.50),S期细胞数显著减少(26.87±3.52),增殖核抗原mRNA表达显著降低(P<0.001);骨桥蛋白过表达质粒转染后,大鼠主动脉平滑肌细胞细胞周期由G0/G1期进入S期,G0/G1期细胞数显著减少(38.90±2.67),增殖核抗原mRNA表达显著增加(P<0.001);4)骨桥蛋白-siRNA转染后,α-平滑肌肌动蛋白、调宁蛋白mRNA水平显著增加(P<0.001);骨桥蛋白过表达质粒转染后,α-平滑肌肌动蛋白、调宁蛋白mRNA水平显著减少(P<0.001)。第三部分:表达谱芯片筛选出128个上调基因,42个下调基因;realtime PCR结果显示骨桥蛋白、αvβ3 mRNA水平显著增加。结论:1)牙龈素促进大鼠主动脉平滑肌细胞增殖,影响大鼠主动脉平滑肌细胞细胞周期,促使其由G0/G1期进入S期,Rgp与Kgp之间促增殖作用无明显差异;2)牙龈素促进大鼠主动脉平滑肌细胞发生细胞表型转变由收缩型转变为合成型,标志蛋白骨桥蛋白表达增加;2)牙龈素对大鼠主动脉平滑肌细胞凋亡的作用不明显;3)牙龈素促进大鼠主动脉平滑肌细胞表达IL-8与TNF-α,Rgp与Kgp之间作用无明显差异;4)骨桥蛋白通过调节α-平滑肌肌动蛋白及调宁蛋白影响大鼠主动脉平滑肌细胞细胞增殖;5)牙龈素通过骨桥蛋白-整合素-黏着斑激酶-细胞骨架蛋白途径调节大鼠主动脉平滑肌细胞的增殖。