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第一部分“废弃”胚胎的囊胚培养及玻璃化冷冻研究目的：探讨第三天移植、冷冻后剩余的“废弃”胚胎在辅助生殖治疗中的利用价值。方法：第三天胚胎移植和冷冻后剩余的不符合冷冻标准的废弃胚胎在体外继续培养至第六天,比较不同类型的废弃胚胎在体外的囊胚形成情况及质量。并比较这些囊胚冷冻复苏后的存活情况及移植后的临床结局。结果：2421个第三天废弃胚胎继续培养后共形成囊胚597个(24.7%),其中160个囊胚形态优良用玻璃化冷冻技术保存。92个囊胚复苏后,囊胚存活率、移植后妊娠率、胚胎着床率分别为66.3%(61/92)、40.9%(18/44)、32.8%(20/61)。共13个健康婴儿出生(8男5女)；另5例流产。结论：来源于发育缓慢和低形态学评分的卵裂期“废弃”胚胎的囊胚能够耐受玻璃化冷冻并获得活产婴儿。将这些胚胎继续培养并将所获囊胚冷冻保存能在一定程度上避免生殖资源的浪费。第二部分冷冻前囊胚发育速度及囊胚质量对妊娠结局的影响目的：探讨冷冻前囊胚发育速度及囊胚质量对复苏周期妊娠结局的影响,评估发育缓慢的囊胚在不孕症治疗中的利用价值。方法：人类胚胎在体外培养至第五、第六、第七天(D5、D6、D7),分别进行玻璃化冷冻。比较D5、D6、D7囊胚冷冻复苏后的存活情况及移植后的胚胎着床率、临床妊娠率和流产率。比较不同质量的囊胚冷冻复苏后移植的临床结局。结果：1.D5、D6、D7冷冻囊胚中优质囊胚的比例有显著差异(72.8%、56.7%、32.0%,P<0.05)。D5、D6、D7囊胚复苏后存活率无统计学差异(98.1%、96.7%、92.6%,P>0.05)；移植后的着床率分别为56.4%、45.0%、20.0%；临床妊娠率分别为69.6%、57.0%、29.4%。D5冻融囊胚移植的着床率(P<0.001)、临床妊娠率(P<0.01)均显著高于D6、D7囊胚。D6囊胚复苏后着床率、临床妊娠率均显著高于D7囊胚(P<0.05)。D5、D6、D7囊胚的流产率无统计学差异(8.5%,9.2%,20.0%,P>0.05)。2.复苏周期单个优质囊胚移植的胚胎着床率(临床妊娠率)显著高于单个非优质囊胚移植(61.5%vs.24.3%,P<0.001),流产率低于非优质囊胚移植,但差异无统计学意义(10.2%vs.22.2%,P>0.05)。3.复苏周期双优质囊胚移植后的胚胎着床率高于仅一个优质囊胚的双囊胚移植患者(59.7%vs.51.1%,P<0.01),但两组的临床妊娠率无显著差异(74.8%vs.69.6%,P>0.05)。双囊胚移植,均为非优质囊胚的患者移植后胚胎着床率(23.8%)、临床妊娠率(35.7%)均显著低于有1或2个优质囊胚的患者(P<0.001)。非优质囊胚移植后的流产率高于其他两组,但差异无统计学意义(16.7%、6.9%、8.3%,P>0.05)。4.将单囊胚移植与双囊胚移植数据合并,无优质囊胚的患者移植后胚胎着床率、临床妊娠率均显著低于有≥1个优质囊胚的患者(24.0%vs.55.9%, P<0.001；30.4%vs.70.2%,P<0.001)；且流产率显著高于有≥1个优质囊胚移植的患者(18.8%vs.8.0%,P<0.05)。5.全部为优质囊胚的患者,不论D5、D6冷冻,复苏周期移植后的着床率、临床妊娠率均无显著差异(61.6%vs.57.5%,P>0.05；73.1%vs.67.1%,P>0.05)。结论：冷冻前囊胚质量对复苏周期囊胚移植的临床结局有显著影响。总体而言D5囊胚复苏后着床率、妊娠率高于D6囊胚,但D6优质囊胚的发育活性与D5囊胚相当。D7囊胚经玻璃化冷冻也可成功着床,但妊娠率低。第三部分囊胚复苏后辅助孵化及辅助孵化位点对妊娠结局的影响目的：探讨复苏后辅助孵化以及不同的辅助孵化位点对玻璃化冻融囊胚移植后临床结局的影响。方法：第五、第六天玻璃化冷冻的3-4期囊胚,复苏后分别在任意位点、靠近内细胞团(ICM)处、ICM对侧进行激光打孔辅助孵化(AH)。囊胚复苏后未进行AH者作为对照组。比较AH组与对照组之间以及不同辅助孵化位点的各组间临床结局的差异。结果：1.总体而言,AH组的优质囊胚率高于对照组(68.2%vs.60.9%,P<0.01)。移植后AH组的胚胎着床率、临床妊娠率均显著高于对照组(57.4%vs.48.8%,P<0.001：70.9%vs.60.7%,P<0.01)。2.对于优质囊胚复苏移植的患者,复苏后AH组的着床率和妊娠率高于对照组(66.2%vs.55.7%,P<0.01：77.9%vs.67.5%,P<0.05)。3.双囊胚移植仅一个优质囊胚者,AH组着床率和妊娠率略高于对照组,但差异无统计学意义(53.7%vs.51.2%,P>0.05；72.5%vs.69.3%,P>0.05)。4.对于无优质囊胚的患者,复苏后AH组的着床率和妊娠率高于对照组,但差异无统计学意义(34.3%vs.27,9%,P>0.05；44.9%vs.34.7%,P>0.05)。5.在任意位点、靠近ICM处、ICM对侧分别进行AH后的囊胚移植后着床率、临床妊娠率、单卵双胎率均无显著差异(56.4%、58.4%、58.3%,P>0.05；70.4%、71.1%、71.6%,P>0.05；1.9%、5.1%、5.2%,P>0.05)。结论：优质囊胚冷冻复苏后进行辅助孵化能提高胚胎着床率及临床妊娠率。不同的辅助孵化位点对囊胚移植后的临床结局没有影响。第四部分复苏周期单囊胚移植与双囊胚移植临床结局的比较目的：比较复苏周期单囊胚移植及双囊胚移植后的临床结局,探讨单囊胚移植的可行性。方法：第五、第六天3-6期囊胚、形态评分在3BC以上,给予玻璃化冷冻。比较复苏周期单囊胚移植与双囊胚移植的妊娠结果,并根据囊胚质量和辅助孵化与否分别进行比较。比较单胎妊娠、双胎妊娠的产科结局。结果：1.单囊胚移植后临床妊娠率较双囊胚移植低(49.8%vs.68.9%,P<0.001),但胚胎着床率无统计学差异(49.8%vs.52.9%,P>0.05)。单囊胚移植后多胎妊娠率显著低于双囊胚移植(0.7%vs.53.7%,P<0.001)。单囊胚移植后未见异位妊娠,双囊胚移植后异位妊娠率为0.9%。2.复苏后进行辅助孵化的优质囊胚,进行单囊胚移植与双囊胚移植后的妊娠率、着床率均无显著差异(78.8%vs.79.1%,P>0.05；78.8%vs.65.9%,P>0.05)。单囊胚移植组无多胎妊娠,双囊胚移植组的多胎妊娠率为66.7%。3.与单胎妊娠相比,双胎妊娠分娩者早产比例高(11.1%vs.52.5%,P<0.001),低体重儿比例高(6.3%vs.38.6%,P<0.001),新生儿平均出生体重低(3335±605g vs.2555±520g,P<0.001)。结论：优质囊胚结合复苏后辅助孵化,进行单囊胚移植能达到与双囊胚移植相似的妊娠率和着床率,且能显著控制多胎妊娠的发生。单胎妊娠后足月分娩健康婴儿的几率更高。