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脊髓损伤(Spinal cordin jury,SCI)为中枢神经系统的严重创伤,是造成瘫痪的主要病因。传统观点认为,SCI是不可修复和再生的,近年来大量研究发现神经干细胞(Neural stem cells,NSCs)具有多向分化潜能,在特定的环境中对神经系统缺血、损伤、变性等原因造成的功能障碍有明显的修复作用。脊髓损伤后再生能力受限主要是因为缺乏诱导、促进神经再生的微环境,而非损伤的轴突本身不具有再生能力。本实验就是研究一些细胞因子,主要是一些粘附分子(adhesion molecules,AM)对NSCs迁移和归巢的影响。
E-钙粘附素(E-cadherin)和β-连环素(β-catenin),由于它们在其作用的时候相互依存,所以经常把它们放在一起研究。E-cad属于钙粘素家族中一员,广泛存在于各类上皮细胞中,是一种钙依赖性粘附分子,主要介导同型细胞间的粘附反应,并起细胞骨架作用,维持组织结构的完整性和上皮极性。cat是一组具有相似结构的胞内糖蛋白家族,分为4大类,即α-cat、β-cat、γ-cat和P120ctn。β-cat通过介导α-cat和E-cad的相互作用参与细胞间的粘附,处在E-cad/cat复合体的核心位置,因而可能是E-cad功能的调节位点。本实验采用实时定量PCR测定孕鼠神经干细胞中E-cad和β-cat在神经干细胞原代和传代4-6代后的含量变化,并结合流式细胞技术测量β-cat相应的变化,从而判断粘附分子对神经干细胞的传代有何影响。
目的:本课题采用RT-PCR测量神经干细胞在原代和传代4-6代后E-cad和β-cat的表达量是否有所变化,同时在蛋白表达水平借助流式细胞技术测量β-cat相应的表达变化,进而判断这两种粘附分子在神经干细胞的传代过程中有何影响,为以后神经干细胞的迁移、植入的研究打下基础。
方法:孕鼠神经干细胞若干,先进行Nestin染色,证明神经干细胞未分化,取一部分进行RT-PCR检测E-cad和β-cat的含量,和流式技术进行β-cat的含量检测,剩余的继续培养,保持传代不分化,传代4-6代,即2周左右,再一次重复前面的操作,统计前后的结果有无差别。
结果:应用RT-PCR发现神经干细胞传代4-6代后,E-cad和β-cat的含量明显增多,且差别具有统计学意义(P<0.05);相应的流式细胞技术测量β-cat的含量变化,我们发现β-cat的含量也明显增多,且差别同样具有统计学意义(P<0.01)。
结论:粘附分子E-cad和β-cat在神经干细胞的传代过程中含量发生明显变化,我们推测它们在神经干细胞原代的保持中起到一定的作用。