自体富含血小板血浆回注对兔关节软骨影响的实验研究

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目的:随着社会经济发展和人口老年化进程不断加快,导致高能、高速创伤及骨关节炎的病人日益增加,关节软骨损伤及其修复也就成为困扰骨科基础研究与临床治疗的棘手问题。因此,系统探讨关节软骨损伤及其修复具有十分重要的意义。关节软骨的损伤与关节内出血有一定密切的联系,已有研究表明:全血或其某些成分仅仅与软骨细胞接触几个小时也会对软骨细胞造成十分严重的损伤。另外,也有学者研究表明:大量的关节内出血对关节软骨的影响比少量的关节内出血要明显。血液组成成份较多,本实验以兔富含血小板血浆(Platelet Rich Plasma, PRP)作为影响因素,将其提取后回注到自体膝关节,探讨其对关节软骨的重要组成成份包括水、蛋白多糖、胶原含量是否有影响;若有以哪一方面或哪些方面的改变为主及其变化规律?因此我们设计了以下实验,以做一个机制性的探讨。通过PRP回注对兔关节软骨影响的实验研究,分析其主要观察指标的参数变化,进一步探讨PRP自体回注对关节软骨的影响。为研究全血中其它不同成分对兔关节软骨的影响提供研究方法及理论依据。方法:将24只新西兰大白兔麻醉后,采自体静脉血离心,得到PRP,回注右后膝关节腔,左后膝作为空白对照组,在第3天重复一次,剂量及方法同前。再将24只实验动物随机分为3组,分别于第1周、3周、5周取材及抽血,测定含水率、胶原中羟脯氨酸含量、血清中MMP-3和TIMP-1含量的改变,同时进行光学观察。全部数据采用SPSS13.0统计软件包进行统计,计量资料数据以均数±标准差(±s)表示,组间差异采用单因素方差分析及Q检验,P<0.05认为有统计学意义。结果:1大体观察正常关节软骨表面富有光泽,颜色明亮,结构均匀。实验侧关节软骨表面粗糙,颜色稍暗,结构轻微破坏。术后第1周最明显,第3周渐好转,第5周恢复接近正常光泽。2染色2.1 HE染色正常关节软骨表面光滑,软骨细胞分布均匀,无簇聚软骨细胞,潮线清晰完整。实验组软骨表面不光滑,可见细小碎屑。细胞排列欠整齐,细胞分裂相增多,可见软骨细胞簇聚,潮线变模糊。2.2 Alcian Blue染色正常关节软骨软骨细胞周围的酸性黏多糖呈深蓝色,基质部分呈淡蓝色;实验组术后第1周软骨细胞周围颜色减退最明显,第3周渐好转,第5周恢复接近正常深蓝色。2.3过碘酸雪夫氏反应(PAS)染色正常关节软骨中软骨组织基质中的中性黏多糖呈紫红色,而软骨细胞内为无色.实验组术后第1周软骨组织基质颜色减退最明显,第3周渐好转,第5周恢复接近正常紫红色。3含水率的改变实验组在第1周关节软骨的含水率(80.67±4.88)%与空白对照组(65.86±3.60)%比较差异显著(P<0.05)。实验组在第3周关节软骨的含水率(72.90±3.69)%与空白对照组(65.73±3.72)%比较差异显著(P<0.05)。实验组在第5周关节软骨的含水率(65.49±2.36)%与空白对照组(65.71±2.91)%比较无差异(P>0.05);实验组的含水率在第1、3、5周的比较均差异显著(P<0.05),空白对照组的含水率在第1、3、5周的比较均无差异(P>0.05)。4胶原含量中羟脯氨酸含量的改变实验组在第1周关节软骨中羟脯氨酸的含量(51.6±3.1)mg/L与空白对照组(62.8±2.5)mg/L比较差异显著(P<0.05)。实验组在第3周关节软骨中羟脯氨酸的含量(62.2±2.9)mg/L与空白对照组(63.8±2.8)mg/L比较无差异(P>0.05)。实验组在第5周关节软骨中羟脯氨酸的含量(63.8±3.1)mg/L与空白对照组(63.4±3.0)mg/L比较无差异(P>0.05)。实验组胶原含量中羟脯氨酸含量在第1周与3、5周比较差异显著(P<0.05),第3、5周比较无差异(P>0.05)。空白对照组胶原含量中羟脯氨酸含量在第1、3、5周的比较均无差异(P>0.05)。5兔血清中MMP-3与TIMP-1含量的改变5.1兔血清中MMP-3含量的改变实验组血清中的MMP-3含量在第1周(7.6±0.6)ug/L与第3周(10.5±1.7)ug/L比较差异显著(P<0.05)。第3周与第5周(7.6±0.7)ug/L比较差异显著(P<0.05)。第1周与第5周比较无明显差异(P>0.05)。5.2兔血清中TIMP-1含量的改变实验组血清中的TIMP-1含量在第1周(3.8±0.7)ug/L与第3周(20.4±3.0)ug/L比较差异显著(P<0.05)。第3周与第5周(7.5±0.9)ug/L比较差异显著(P<0.05)。第1周与第5周比较差异显著(P<0.05)。结论:1自体PRP回注可对关节软骨产生影响。2自体PRP回注对关节含水率及蛋白多糖影响较为明显。3自体PRP回注对胶原含量影响较小。4自体PRP回注血清中MMP-3与TIMP-1的含量的呈现波动性变化。
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