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目的:研究不同剂量新型基因工程人肿瘤坏死因子a(nrhTNFa)对小鼠骨髓造血功能的影响及与化疗药物的协同作用,探讨其毒性作用机理,为临床用药提供理论依据。 方法:nrhTNFa低剂量(125万U/kg)、nrhTNFa中剂量(500万U/kg)、nrhTNFa高剂量(2000万U/kg)肌肉内注射,测定小鼠骨髓有核细胞(bone marrow nucleated cells,BMNCs)计数、外周血白细胞(white blood cells,WBCs)计数、血小板(platelets,PLTs)计数、血红蛋白(HB)含量,瑞氏染色后观察小鼠骨髓增生程度,并用流式细胞仪、琼脂糖凝胶电泳、电镜检测小鼠骨髓细胞凋亡,用流式细胞仪分析小鼠骨髓细胞增殖周期变化。 结果:1、对外周血细胞计数及骨髓增生的影响:低剂量nrhTNFα组小鼠BMNCs和外周血细胞计数无明显变化;中剂量nrhTNFα轻度减少BMNCs计数,但不影响外周血细胞计数;高剂量nrhTNFa可使小鼠BMNCs计数、WBCs计数和HB含量减少,但对PLTs计数无明显影响;nrhTNFa 3种剂量与环磷酰胺(CTX)联合应用不影响CTX减少BMNCs计数和外周血细胞计数的作用。低、中剂量nrhTNFa不影响小鼠骨髓增生程度;高剂量nrhTNFa可抑制小鼠骨髓增生,但抑制作用明显轻于环磷酰胺(CTX),3种剂量nrhTNFa与CTX联合应用时小鼠骨髓增生程度与单用CTX基本一致,说明nrhTNFa对CTX引起的骨髓抑制无协同作用。 2、诱导骨髓细胞凋亡的作用:(1) 电镜观察可见高剂量nrhTNFa组小鼠骨髓细胞出现细胞早期凋亡的特征。(2) 流式细胞仪检测结果显示低、中、高剂量nrhTNFa组小鼠骨髓细胞的凋亡率分别为1.2%、2.4%、16.2%,正常对照组小鼠骨髓细胞的凋亡率为0.5%。(3) 琼脂糖凝胶电泳显示出中、高剂量nrhTNFa组小鼠骨髓细胞DNA呈阶梯状分布的电泳条带。这些指标证明高剂量nrhTNFα有诱导骨髓细胞凋亡的作用,中剂量nrhTNFα可能有诱导骨髓细胞凋亡的作用,