酶催化法和金属离子催化法联用制备人参皂苷Rh1组及其产物组成分析

来源 :大连工业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:huxiangye
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本论文以三醇类人参皂苷Re为底物,采用酶转化和金属离子催化联用的二步法,催化转化制备人参皂苷Rh1组(包括20(S)-Rh1、20(R)-Rh1、Rk3、Rh4等,简称Rh1组)为目标,研究了各步骤中的催化反应条件,并对产物进行了组成分析和纯化。选取Absidia sp.P39r菌株产酶,对其发酵条件进行了优化,确定最佳产酶发酵条件:以人参为诱导物,诱导物添加量为25%(V/V),发酵时间为6 d;提取的粗酶液水解人参皂苷Re生成Rg1的酶反应最优条件为:p H 5.0,反应温度40℃,反应溶液中乙醇浓度10%(V/V),底物浓度12 mg/m L,反应时间16 h。在上述最佳酶反应条件下制备得到Rg1,转化得率为70.5%(W/W),纯度为99.7%(W/W)。选择Fe3+为金属离子催化剂,确定其催化人参皂苷Rg1的最优条件为:45%(V/V)乙醇溶剂,Fe3+浓度1.4 mol/L,反应温度50℃,底物浓度17 mg/m L,反应时间14 h。以人参皂苷Rg1为底物采用上述最佳Fe3+反应条件,制备得到Rh1组混合物,转化得率为80.2%(W/W)。HPLC组成分析表明,Rh1组混合物中20(S)-Rh1、20(R)-Rh1、Rk3、Rh4的含量分别为36.38%(W/W)、18.79%(W/W)、5.60%(W/W)、20.48%(W/W)。采用液相色谱制备法对Rh1组中一种未知化合物(化合物1)进行了分离纯化,经核磁共振检测鉴定化合物1为25-trihydroxydammar-6-O-β-D-glucopyranosyl-20(-H2O)-20(22)-en-protopanaxatriol,命名为25-OH-Rh4。
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