目的多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome, PCOS)是育龄期妇女常见的一种生殖内分泌疾病,严重影响了女性的生殖能力,在女性不孕中,不排卵因素占30%-40%,PCOS占无排卵性不孕症的50%-70%。PCOS I临床表现具有高度异质性,主要有：月经稀发或闭经、肥胖、多毛、痤疮、黑棘皮症等。PCOS内分泌异常主要表现为：高雄激素血症、促性腺激素水平异常、胰岛素抵抗、高胰岛素血症、糖代谢异常等,其中最重要的内分泌特征是高雄激素血症,约65%-85%的PCOS患者存在高雄激素血症。雄激素合成增多或代谢障碍均可导致雄激素升高。雄激素的合成和代谢在细胞、分子水平上受到了多种因子的调节,如胰岛素生长因子、肾素、瘦素等,目前已知的因子主要是通过对下丘脑-垂体-卵巢轴、肾上腺等的作用,来影响雄激素的生成及转化过程。近年来研究发现,在雄激素向雌激素转化过程中存在一种重要的酶,可以限制其生物反应速率,被认为是该反应的限速酶,这种酶被称为细胞色素P450芳香化酶(aromatase cytochrome P450, P450arom)。 P450arom在多种组织中均有表达,如卵巢、肝脏、肌肉、脂肪组织、乳腺组织等,根据各组织中雄激素底物的不同生成不同活性的雌激素。在卵巢中,颗粒细胞和膜细胞中均可见P450arom的表达,同时,雄激素向雌激素的转化主要在颗粒细胞中进行,主要以睾酮(testosterone, T)为底物,转化生成雌二醇(estradiol, E2),少部分则以雄烯二酮为底物转化生成雌酮。由于P450arom是睾酮向雌二醇转化过程中的限速酶,减少的其生成或抑制其活性都将直接影响该转化去路的进行,睾酮堆积造成卵巢局部的雄激素水平升高、出现高雄激素血症,高雄激素血症又可以进一步加剧排卵障碍。因此,有学者认为PCOS患者可能存在P450arom活性的不足。研究表明,P450arom的表达受多种调节因子影响和调控,如促性腺激素、类固醇激素受体、细胞因子、CYP19基因的单核苷酸多态性、CYP19基因突变或功能缺失等均可导致P450arom的表达改变。目前,P450arom的具体影响机制尚未研究透彻。过氧化物酶体增殖剂激活受体γ (peroxisome proliferators-activated receptor gamma? PRARy)属于核受体超家族,生物学功能多样,参与糖类代谢、脂类代谢、脂肪细胞的分化、胰岛素抵抗、炎性反应及卵巢组织的周期性调控等方面均发挥重要作用。近来有研究表明,PCOS患者卵巢颗粒细胞中PRARγ mRNA与其相应卵泡液睾酮T、游离雄激素指数(FAI)水平呈正相关。PPARγ激动剂可抑制人卵巢颗粒细胞P450arom活性及其mRNA表达水平。因此我们推测PCOS患者卵巢颗粒细胞中PPARy mRNA、P450arom mRNA与高雄激素血症之间可能存在内在的调节关系。相关研究国内外未见报道。本研究通过在控制性超排卵周期中的收集黄素化的颗粒细胞,检测其P450arom mRNA、 PPARy mRNA的表达；初步探讨PPARy、P450arom对PCOS高雄激素血症发生的作用。材料与方法选择2012年11月至2013年1月在郑州大学第一附属医院生殖医学中心行常规体外受精-胚胎移植助孕治疗的患者共65例,分为两组：PCOS组30例(实验组)和非PCOS组35例(对照组)。促排卵方案采用我中心常规黄体期长方案：于黄体中期应用促性腺激素释放激素(gonadotropin releasing hormone agonist, GnRH-a)进行垂体降调节,待降调达标后应用促性腺激素(gonadotropin, Gn)行超促排卵,根据卵泡生长情况及内分泌变化及时调整用药,卵泡发育至有2个或2个以上卵泡直径≥18mm时提示卵泡已进入成熟阶段,于当晚注射人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin, hCG)针,卵泡于HCG注射后36-37小时可达成熟状态,此时在阴道B超引导下行静脉全麻下穿刺取卵术。采用短时受精法,收集的卵母细胞在体外培养约4小时后,与优化的男方精子受精。根据胚胎形成情况,于2-3天后胚胎移植术,术后给予黄体支持治疗。对血清及卵泡液以酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)测定T、E2水平。所需血液标本分别为月经第2-3天及注射HCG日晨起空腹抽取的肘静脉血液,约4m1。卵泡液(FF)要求清亮、无血染,且要求为取卵日第一管卵泡直径>18mm的卵泡。所收集的静脉血和卵泡液均先于低温离心机中离心10分钟,转速设定为2000rpm/min离心,所获得的上清液即为所需血清及卵泡液,轻轻吸取后装入无菌EP管中,以封口膜封口,冻存于-80℃冰箱。收集捡卵后剩余的全部卵泡液提取颗粒细胞,进一步提取总的RNA,采用逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-Polymerase Chain Reaction, RT-PCR)法检测两组患者卵巢颗粒细胞P450arom mRNA和PPARγmRNA表达。结果1. P450arom mRNA同时表达于PCOS组及正常组的黄素化颗粒细胞中,正常组的表达量显著高于PCOS组,差异有统计学意义(P<0.05)。2. PCOS组卵巢颗粒细胞P450arom mRNA表达水平与卵泡液中E2水平呈正相关性(r=0.515,P<0.05),与卵泡液中T水平呈负相关性(r=-0.631,P<0.05),与IVF-ET结局无相关性(P>0.05)。3. PPARγ mRNA同时表达于PCOS组及正常组的黄素化颗粒细胞中,PCOS组的表达量显著高于正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。4. PCOS组卵巢颗粒细胞PPARγ mRNA表达水平与卵泡液中T水平呈正相关性(r=0.248,P<0.05),与卵泡液中E2水平呈负相关性(r=-0.387,P<0.05),与IVF-ET结局无相关性(P>0.05)。5. PCOS组卵巢颗粒细胞PPARγ mRNA表达水平与P450arom mRNA表达水平呈负相关性(r=-0.569,P<0.05)。结论1. PCOS中卵巢颗粒细胞P450arom呈低表达,PPARγ呈高表达,两者均与卵泡液中T、E2有相关性,可能共同通过促进雄激素的生成参与PCOS的发病。2. PCOS卵巢颗粒细胞PPARγ mRNA表达水平与P450arom mRNA表达水平有相关性,两者可能共同参与了高雄激素的生成通路。3. PCOS卵巢颗粒细胞PPARγ及P450arom的表达与IVF-ET结局可能无关。