脱管散混悬液对金黄色葡萄球菌致大鼠慢性创面干预的实验研究

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目的:评定脱管散混悬液对慢性创面金黄色葡萄球菌的抑菌作用和促进创面愈合作用,并探讨其可能的作用机理。方法:1、制备标准菌液将金黄色葡萄球菌(ATCC25933)进行复苏、接种、传代、培养等制成浓度为1×109cfu/ml的标准菌液。2、动物造模、分组及处理健康雄性清洁级Wistar大鼠108只,全部采用“皮肤缺损+细菌感染+激素干预”的方法制成大鼠慢性创面模型,造模成功后行随机化分组,分为:A组(实验组)、B组(阳性对照组)和C组(模型组),每组36只。A组用浸有lml脱管散混悬液(0.005g/ml)的边长为3cm×4cm的长方形纱布外敷换药;B组用浸有lml稀碘伏(0.4%)的边长为3cm×4cm的长方形纱布外敷换药;C组用浸有lml生理盐水的边长为3cm×4cm的长方形纱布外敷换药。各组大鼠经换药后,均用三层无菌纱布覆盖,外套自制钢丝网罩固定,用同样的方法每日换药1次。3、观测指标观测大鼠一般情况、创面愈合时间,并于用药后第1,3,7,10,14和21天,六个时间段测定各组创面愈合率,创面分泌物PH值,同时各组随机选取6只大鼠处死,取痂下组织行菌量测定,并另切取部分组织进行组织形态学(HE染色)观察,及通过免疫组织化学方法观测以上6个时间点各组创面中表皮生长因子(EGF)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况。4、统计方法采用SPSS19.0软件对实验数据进行统计分析,计量资料用t检验,计数资料用卡方检验,所有统计分析方法均以P<0.05为差异有统计学意义,P<0.01为有统计学显著性差异。结果:1、 A组大鼠在治疗过程中其活动、进食状况、创面及周围炎症和分泌物情况以及肉芽组织生长等大体情况较B、C两组优越。2、各组大鼠创面愈合时间:A组平均愈合天数为13.84±1.08d,均少于B组16.11±1.39d和C组20.63±1.25d,与B、C两组间比较差异有统计学意义(分别为P<0.05和P<0.01);B组与C组比较有统计学显著性差异(P<0.01)。3、各组创面愈合率:在第3、10天,A、B两组与C组比较有统计学显著性差异(P<0.01);第7、10天:A组创面愈合率高于C组,两组比较有统计学显著性差异(P<0.01),同时A组与B组比较差异有统计学意义(P<0.05);第14天A组创面愈合率仍高于C组,两组比较有统计学显著性差异(P<0.01)。4、创面分泌物PH值检测结果:在第3天时,A、B两组创面分泌物PH值均低于C组,与C组比较差异均有统计学意义(分别为P<0.01和P<0.05),A组与B组比较有统计学显著性差异(P<0.01);在第7天,A组与B、C两组比较差异有统计学意义(分别为P<0.01和P<0.05)。5、创面组织细菌学检测结果:在第1、14天,A组创面痂下组织菌量低于C组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);在第3、7、10天,A组与C组比较有统计学显著性差异(P<0.01),B组与C组比较差异有统计学意义(P<0.05);在第3天A组与B组比较有统计学显著性差异(P<0.01);第7、10天A组与B组比较差异有统计学意义(P<0.05)。6、创面组织病理学观察:用药后第1天,各组炎症反应均较明显;第3天, A组较B、C组创面渗出明显,见炎性细胞浸润带及成纤维细胞,巨噬细胞增生明显;第7—10天,A组和B组创面分别有较多肉芽组织充填,A组中成纤维细胞数量较多、体积大,毛细血管丰富,可见散在胶原纤维,这些变化较B、C两组为明显;第14天,A组成纤维细胞数量明显减少,新生胶原纤维粗大,开始出现少量新生毛囊上皮与其他皮肤附属器,创面大部分被新生的表皮覆盖,此情况较较B、C两组优越;第21天,A、B两组创口基本愈合,被肉芽组织充填并有新生表皮覆盖,A组间质中可见大量排列整齐的胶原纤维,簇集或束状排列,情况较B、C组为好。7、免疫组化观察EGF的表达变化情况:不同时间段EGF表达的平均光密度比较:第3、14天,A组与C组比较差异有统计学意义(P<0.05);第14天,A组与B组比较差异有统计学意义(P<0.05);第10天,A组与C组比较有统计学显著性差异(P<0.01)。不同时间段EGF表达的平均灰度比较:第10、14天,A组与B、C两组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。8、免疫组化观察VEGF的表达变化情况:不同时间段VEGF表达的平均光密度比较:第3、7、10天,A组与C组比较有统计学显著性差异(P<0.01);第7、10天,A组与B组比较差异有统计学意义(P<0.05)。不同时间段VEGF表达的平均灰度比较:第3、7天,A组与B、C两组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:1脱管散混悬液对慢性创面中金黄色葡萄球菌有抑菌作用。2脱管散混悬液可以改变慢性创面分泌物的PH值,酸化创面。3脱管散混悬液可调节慢性创面愈合过程中EGF、VEGF的表达。4脱管散混悬液能够促进慢性创面的愈合,其促愈机制可能与其酸化创面、抑制创面细菌生长及适时上调慢性创面愈合过程中EGF、VEGF的表达有关。
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