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研究背景及目的肝细胞肝癌(Heptaocellular Carcinoma, HCC)是常见的恶性肿瘤之一,全球发病率占恶性肿瘤第6位,病死率居世界第三。在我国,每年有约14万人死于肝癌,约占世界肝癌死亡人数的50%。慢性乙型肝炎病毒感染是我国肝癌的主要危险因素。肝脏慢性炎症引起持续、非特异、低效的免疫系统激活被认为是促进肿瘤发生、生长和进展的重要因素。在肝癌中,炎症细胞和炎症因子共同构成肝癌的炎症微环境。一方面,肿瘤细胞分泌炎症因子诱导内皮细胞及循环中的炎症细胞向肿瘤灶部位迁移,调节机体的免疫反应、血管生成、肿瘤生长和转移；另一方面,肿瘤微环境中的炎症细胞也可以分泌炎症因子,参与调控肿瘤的发生发展和转移。EGF、EGFR在肝癌组织过表达,与肝癌发生、发展有密切关系,EGF/EGFR及其信号通路在肝癌炎症微环境中发挥重要作用。本研究选用两种人肝癌细胞系HepG2、HCCLM3,检测了其炎症因子表达的差异,选取表达较高的CXCL5、IL-8作为研究对象,验证其在两种细胞系中的表达差异,检测两种肿瘤细胞系分泌CXCL5、IL-8及EGF对其分泌的影响,进而探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、细胞外调解蛋白激酶(Extracellular Regulated Protein Kinase, ERK)和PI3K/Akt信号通路是否参与EGF刺激肝癌细胞系分泌CXCL5.IL-8的调节,及两种炎症因子之间是否存在反馈调节机制。研究方法通过炎症因子及其受体PCR芯片检测人肝癌细胞系HepG2、HCCLM3中炎症因子表达差异；酶联免疫吸附(ELISA)检测EGF刺激HepG2、HCCLM3细胞后CXCL5、IL-8的浓度；Western Blot方法测定EGF刺激HepG2、HCCLM3后p38MAPK, ERK及Akt蛋白的表达；用CCK-8法检测EGF及通路抑制剂对HepG2、HCCLM3增殖的影响；用流式细胞术(Flow Cytometry, FCM)检测EGF及通路抑制剂对HepG2、 HCCLM3细胞凋亡及细胞周期的影响；用Cell-IQ检测EGF及其通路抑制剂对HepG2、 HCCLM3增殖和运动的影响。研究结果1.炎症因子及其受体PCR芯片提示HCCLM3中IL-8与CXCL5表达较HepG2细胞显著升高(上调>2倍以上);2. HepG2. HCCLM3在无EGF刺激情况下分泌IL-8和CXCL5,但HCCLM3较HepG2分泌量明显增高(P<0.05)；EGF刺激后可以促进HepG2、HCCLM3分泌CXCL5、IL-8,并具有时间和剂量依赖性(均P<0.05)。3.四种不同信号通路抑制剂：埃罗替尼(Erlotinib, EGFR inhibitor).U0126(ERK通路抑制剂)、BEZ235和SHBM1009(均为PI3K通路抑制剂)可显著抑制细胞分泌CXCL5和IL-8(P<0.05)。4.EGF在HepG2细胞中,促进细胞增殖,而在HCCLM3细胞抑制细胞增殖。四种不同信号通路抑制剂：U0126、BEZ235和SHBM1009均可显著抑制两种肝癌细胞的增殖和运动(P<0.05),并促进凋亡。BEZ235和SHBM1009(均为PI3K通路抑制剂)可使细胞周期停滞在不同的阶段。5. Western blot:EGF刺激HepG2. HCCLM3细胞后可上调p38MAPK、ERK和PI3K/Akt磷酸化水平。四种不同信号通路抑制剂可不同程度的抑制上述信号通路。6. CXCL5刺激可以负反馈调节HepG2、HCCLM3细胞IL-8的分泌,并具有时间和剂量依赖性(P<0.05)。7. CXCR2选择性抑制剂可以抑制EGF诱导的IL-8分泌,不同剂量组间有统计学差异(P<0.05)。主要结论1. HepG2、HCCLM3两种肝癌细胞株的炎症因子的表达存在显著差异；两者在无EGF刺激下均能分泌IL-8和CXCL5;2.EGF能显著增加HepG2、HCCLM3分泌IL-8和CXCL5,并具有时间和剂量依赖性；并受PI3K/Akt、ERK、p38MAPK信号通路调节；3.EGF及PI3K/Akt、ERK、p38MAPK信号通路抑制剂,可以调节肝癌细胞的增殖、运动和凋亡；EGF对HepG2、HCCLM3肝癌细胞的增殖作用不同；4.肝癌细胞株分泌CXCL5和IL-8存在反馈调节,CXCL5负反馈调节IL-8的分泌；CXCL5和IL-8的受体CXCR2与EGFR通路之间存在交叉对话作用；