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研究目的抑郁症是最常见的精神疾病之一,是造成重大心理社会障碍和功能障碍的原因之一。虽然目前有许多精神药物的选择,但仍有大约40%的抑郁症患者对当前可用的药物没有反应。这在一定程度上是由于对抑郁症的发病阶段认识不足、抑郁症背后的病理生理学机制理解不够及现临床中所用药物多为生物合成剂造成的。在抗抑郁治疗的多种机制中,促进海马神经再生显得尤为重要。由于microRNA对神经元的生成具有决定性的作用,因而在神经发生障碍调节机制方面得到高度关注和重视。miR-124在脑内的含量最为丰富,它是成年期神经发生过程的重要调节因子。中医理论认为肝主疏泄,调畅情志,因此调肝治法方药一直被广泛应用于情志相关疾病的治疗。加味四逆散是根据“肝主疏泄”的理论所创制的抗抑郁方药,前期研究所显示出来独有的整体调节功能和抗抑郁效应具有良好的科研和开发前景。因此,本课题从miR-124与神经发生的关系角度,进一步探讨调肝方药加味四逆散的抗抑郁机制,为今后中医临床防治有关肝失疏泄所致的情志疾病提供新的视角和思路,并为今后开治疗抑郁症的新药奠定基础。研究方法1.制备慢性不可预计轻度应激大鼠动物模型,运用qRT-PCR、免疫荧光、原位杂交等方法检测相关指标的变化,动态观察慢性不可预计轻度应激模型大鼠的抑郁样行为变化、海马DG区miR-124含量的变化及海马DG区神经干细胞的增殖分化的情况,平行观测海马DG区miR-124与神经发生的关系;2.培养海马神经干细胞,制备miR-124功能获得型模型及miR-124功能缺失型模型,运用细胞免疫荧光双标的进一步明确海马神经干细胞miR-124与神经发生的关系;3.使用调肝方药加味四逆散干预miR-124功能缺失型模型、miR-124功能获得型模型,观察调肝方药对海马神经干细胞miR-124及神经干细胞增殖的影响。研究结果1.慢性应激致抑郁的过程中,不同的行为学出现的时间不一样。与正常组相比,模型组大鼠的体重下降最早出现在造模第3周,自发活动减少最早出现在造模第5周,而糖水偏爱度的下降最早出现在造模第6周;2.慢性应激致抑郁的过程中,与正常组比较,模型组大鼠的海马区miR-124-3p表达量呈现双向变化。具体表现在造模第5、6周,大鼠海马区miR-124-3p含量升高,造模第7、8周,模型组大鼠海马区miR-124-3p含量显著降低;3.慢性应激致抑郁造模第8周,与正常组比较,模型组大鼠的Brdu/DCX、NeuN阳性细胞数明显减少;4.在体外实验一,Brdu/DCX双标荧光实验结果中,与正常组比较,GOF模型组的比值无显著性改变,LOF模型组则明显降低;5.在体外实验二,Brdu/Nestin双标荧光实验结果中,与正常组相比,LOF模型组的比值下降,经JWSNS干预后,比值明显升高。研究结论1.慢性不可预见轻度应激大鼠模型可致海马区miR-124异常表达,出现阶段性的升高和降低的双向性变化;2.慢性不可预见轻度应激导致的抑郁症发病过程中,行为学的表现出现在应激第3-8周,而海马神经发生障碍出现在应激第7-8周;3.在CUMS诱导的抑郁症大鼠发病过程中,抑郁样行为表型,海马区miR-124,海马DG区神经发生呈现动态变化,提示抑郁症发病过程不同的病理阶段有不同的病理改变;4.在本研究的体外实验中,我们发现miR-124含量下降可能是神经干细胞增殖与分化障碍的部分原因,而加味四逆散可以逆转这一现象;