重组酶介导的核酸恒温扩增体系构建及其在SNP分型中的应用

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体外核酸快速扩增技术是一种可使微量核酸在体外高效快速扩增的技术,被广泛应用于分子生物学、医学和法理鉴定等领域。重组酶介导扩增法(RAA)是在现有体外核酸扩增原理的基础上发展起来的恒温体外快速扩增核酸技术;该技术利用重组酶入侵、单链结合蛋白绑定DNA单链和DNA聚合酶扩增代替了传统PCR的热循环解链过程,实现在37℃恒温下的核酸快速扩增。本研究以重组酶UvsX、辅助聚集蛋白UvsY、单链绑定蛋白Gp32和聚合酶klenow(exo-)为核心酶,构建了RAA扩增体系,就模版的差异性、体系的特异性、保真度和灵敏度等参数与PCR扩增体系进行了比较;为提高RAA系统扩增的专一性并应用于SNP的检测,本实验从阳离子浓度以及体系最适pH值对体系进一步优化;结果表明,RAA具有更高的敏感性、特异性和扩增更复杂模版的能力; RAA法对SNP位点的检测与测序结果一致。
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