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在肾脏,足细胞附着在肾小球基底膜外,其足突上多种分子相互交错形成裂孔隔膜(slit diaphragm,SD),是肾小球滤过屏障的重要组成部分。足细胞在保护肾小球滤过屏障的完整性方面起着重要的作用。足细胞的功能与肾脏功能密切相关,其超微结构的变化或与功能相关的分子表达改变均与肾脏功能的损害有着密切的关系。一般来说,上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是极化上皮细胞发生许多生化变化,以获得间充质细胞表型。足细胞足上皮细胞,当受到不同的刺激(如TGF-β,高浓度的葡萄糖,血管紧张索Ⅱ,阿霉素等)时,有可发生EMT。当EMT的发生,上皮表型标志物如E-cadherin,P-cadherin,nephrin、podocalyxin,Synaptopodin 的下调,与间质表型标志物如desmin,FSP-1,MMP-9,ILK,fibronectin,vimentin,α-SMA,Ⅰ 型胶原及 snai 等上调。在受损的肾脏产生肾间质纤维化中,EMT被认为是一个关键因素。足细胞EMT可引起肾小球滤过屏障的损伤和蛋白尿,严重者可导致足细胞由肾小球基底膜脱离和细胞凋亡,导致足细胞数量减少,从而加重蛋白尿和肾脏功能损伤甚至肾小球硬化。足细胞EMT是研究蛋白尿和肾脏纤维化发生发展的一个重要方面。研究目的:探讨在高浓度的葡萄糖和血管紧张素Ⅱ存在下,足细胞的EMT以及TCF8在足细胞EMT中的影响。方法:足细胞经分化后,经与血管紧张素Ⅱ和葡萄糖分别孵育,Western blotting方法检测蛋白表达;Transwell小室检测细胞的迁移和侵袭能力。qPCR方法检测mRNA表达。结果:1.血管紧张素Ⅱ和高糖对正常足细胞E-cadherin、α-catenin、N-cadherin和vimentin蛋白表达的影响血管紧张素Ⅱ和葡萄糖可使足细胞上皮标志分子E-cadherin和α-catenin蛋白的表达逐渐降低,而足细胞间质标志分子N-cadherin和Vimentin表达均升高。2.血管紧张素Ⅱ和高糖对正常足细胞TCF8蛋白表达的影响足细胞经葡萄糖或血管紧张素Ⅱ孵育后,随着葡萄糖或血管紧张素Ⅱ浓度的增加,TCF8蛋白的表达逐渐升高。3.血管紧张素Ⅱ和高糖对正常足细胞迁移和侵袭能力足细胞经葡萄糖或血管紧张素Ⅱ作用后,其迁移和侵袭能力有明显增加。4.TCF8 siRNA 筛选足细胞经TCF8基因沉默后,TCF8的表达明显降低,其中1#siRNA的作用最强。5.沉默 TCF8 基因对 E-cadherin、a-catenin、N-cadherin 和 vimentin 蛋白表达的影响未经转染的细胞上皮标志物分子E-cadherin和α-catenin均有表达,而间质标志物分子N-cadherin和vimentin较低。经高糖或血管紧张素Ⅱ刺激后,E-cadherin 和 α-catenin 表达降低,N-cadherin 和 vimentin 表达增加。shTCF8#1转染细胞后,高浓度葡萄糖和血管紧张素Ⅱ均可使上皮细胞标志物E-cadherin和α-catenin表达增加,间质标志物分子N-cadherin和vimentin表达降低,表明TCF8表达沉默后,细胞不利于间质转换,提示TCF8 具有促进EMT作用。6.沉默TCF8基因对足细胞迁移和侵袭能力未经转染的细胞经高糖或血管紧张素Ⅱ刺激后,细胞迁移和侵袭能力增加,TCF8基因沉默后,细胞迁移和侵袭能力降低。表明TCF8表达沉默后,细胞迁移能力下降。结论:本研究结果提示高糖和血管紧张素Ⅱ可促进足细胞EMT,TCF8促进了该EMT过程。