论文部分内容阅读
目的：观察糖尿病大鼠脊髓雷帕霉素靶蛋白(mTOR)在痛觉敏化过程中表达的变化，以及鞘内注射不同剂量雷帕霉素对糖尿病神经病理性疼痛(DNP)大鼠机械痛阈和脊髓mTOR、S6K表达的影响，探讨mTOR在DNP发病机制中的重要作用。 方法：取40只180-220g SD大鼠，随机分成对照组（C组，n=20）和糖尿病组（D组，n=20），C组腹腔注射枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液6ml/kg作为造模对照，D组腹腔注射链脲霉素(60mg/kg)行糖尿病造模。于第造模前、造模后每3天测定机械痛阈，造模后3天及每周测定大鼠体重血糖至第四周;并且于造模前、造模后1、2、3、4周分别取4只大鼠脊髓腰膨大组织，应用Western Blotting技术检测脊髓mTOR及p-mTOR表达的变化; 另取鞘内置管成功的SD大鼠30只，随机分成5组每组6只，正常对照组(NC组)腹腔注射枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液6ml/kg作为造模对照，糖尿病溶剂对照组(DV组)、糖尿病雷帕霉素1μg组（DR1组）、糖尿病雷帕霉素3μg组（DR3组）、糖尿病雷帕霉素10μg组（DR10组）均腹腔注射链脲霉素(60mg/kg)行DNP造模。DR1、DR3、DR10组鞘内注射预定量的雷帕霉素(预定剂量的雷帕霉素溶于10μl4％DMSO)，NC、DV组鞘内注射10μl4％DMSO，所有组均采用15μl生理盐水冲管，于第四周开始治疗，连续治疗7天。鞘内置管前、糖尿病造模前、造模后1周、2周、3周、治疗后1天、3天、5天、7天测定机械痛阐，血糖与体重测量同第一部分。最后一次行为学测试结束后，脱臼处死大鼠，取脊髓腰膨大组织WesternBlotting技术检测mTOR、p-mTOR、S6K、p-S6K蛋白的表达变化，RT-PCR技术检测mTOR、S6K mRNA表达变化。 结果：1.糖尿病大鼠机械痛阈及mTOR蛋白表达的变化:与造模前或C组比较，D组机械痛阈于造模后9天开始下降，于造模后21天下降到最低点，并稳定于这一状态(P＜0.01);相对于同周龄正常大鼠，与造模前比较，糖尿病大鼠脊髓mTOR在造模后2周开始升高，而p-mTOR在造模后1周开始增高，并且均在造模后3-4周显著增高(P＜0.01)。 2.鞘内注射不同剂量雷帕霉素对DNP大鼠机械痛阈和脊髓mTOR、S6K表达的影响:与造模前比较，DV、DR1、DR3、DR10组在造模后3周MWT显著减低(p＜0.01);而雷帕霉素治疗7天后，DR1、DR3、DR10组MWT显著高于DV组，且MWT DR10组高于DR1组(p＜0.01)。与NC组比较，DV组mTOR、S6K mRNA、mTOR、S6K蛋白及其磷酸化产物表达显著增高(p＜0.01)。与DV组比较，DR1、DR3、DR10组mTOR、S6K mRNA、mTOR、S6K蛋白及其磷酸化产物显著降低，且其表达在DR1、DR3、DR10三组依次降低，两两比较差异有显著性(p＜0.05或p＜0.01)。 结论：1.大鼠脊髓mTOR上调并活化可能是糖尿病神经病理性疼痛的发病机制之一。2.鞘内注射雷帕霉素抑制mTOR和S6K的表达与磷酸化，并上调机械痛阈。3.雷帕霉素1、3、10μ g均可有效的mTOR的活动，缓解糖尿病神经病理性疼痛，并且呈剂量相关性。