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第一部分年龄对心外膜脂肪及冠状动脉周围脂肪组织容积的影响目的:探讨心外膜脂肪组织(epicardial adipose tissue,EAT)容积及冠状动脉周围脂肪组织(pericoronary adipose tissue,PCAT)容积与年龄的相关性。方法:80例体重指数正常行冠状动脉CTA的健康体检病人,按年龄分为35岁以下组10例,35-44岁组20例,45-54岁组20例,55-64岁组20例和65岁以上组10例。冠脉CTA测定心外膜脂肪容积和厚度,并计算左主干一前降支、回旋支、右冠状动脉周围脂肪组织。结果:心外膜脂肪组织(EAT)容积随年龄增加呈现逐渐增加趋势,65岁以上组>55-64岁组>45-54岁组>35-45岁组>35岁以下组,分别为[(211.53土14.03cm’>176.25士21.63cra’>157.13土27.2W>141.15土26.93cra’>107.86土14.31cm3),(p<0.05)];心外膜脂肪(EAT)厚度在35岁以下组明显少于其它4组(p〈0.05);左主干-前降支周围脂肪组织(LM-LAD PCAT)容积随年龄增加逐渐增加,65岁以上组〉55-64岁组〉45-54岁组〉35-44岁组>35岁以下组,分别为[(9.06±0.54cm3>7.90±1.70cra’>8.39±0.60cm3>6.54±0.86cm’>4.45±0.60cnO,(p<0.01);右冠周围脂肪组织(RCA PCAT)容积也随年龄增加而逐渐增加,65岁以上组>55-64岁组>45-54岁组〉35-44岁组>35岁以下组,[(11.90±1.07cm’>10.18±1.07cm’>9.33±1.30cra’>7.34±1.48cm’>6.15±1.56c m’),(p<0.01)];回旋支周围脂肪组织(LCXPCAT)容积在35岁以下组明显少于其它4组(p<0.05)。相关分析显示年龄与心外膜脂肪组织容积、左主干-前降支周围脂肪组织容积和右冠周围脂肪组织容积呈正相关(r分别为0.749,0.694和0.709,p<0.05)o结论:心外膜脂肪组织容积、左主干-前降支周围脂肪组织和右冠周围脂肪组织均随年龄增长而增加。第二部分老年人心外膜及冠状动脉周围脂肪组织容积与冠心病的相关性研究目的:探讨老年人心外膜及冠状动脉周围脂肪组织容积与冠状动脉粥样硬化的相关性。方法:60例同时行冠脉CTA及冠状动脉造影体型正常的老年患者,按病变程度分为老年正常冠脉组(9例),老年冠状动脉粥样硬化组(22例)和老年冠心病组(29例)。冠脉CTA测定心外膜脂肪容积和厚度,并计算左主干一前降支、回旋支、右冠状动脉周围脂肪组织。结果:在老年人中随着动脉粥样硬化程度的加重,心外膜脂肪容积虽呈增加趋势,但差异无统计学意义;老年冠心病组患者心外膜脂肪厚度较正常冠脉组增加[(3.98±1.07mm>3.32±0.47mm),/M).03],但与冠状动脉粥样硬化组患者相比差异无统计学意义。老年冠心病组患者左主干-前降支周围脂肪组织容积较正常冠脉组和动脉粥样硬化组增加[(11.26±1.84)cm3〉(9.86±1.41)cm3>(8.93±1.10)cm3,KO.001和网.003];老年冠心病组患者右冠状动脉周围脂肪组织容积较正常冠脉组增加[(14.14土2.69cm3>11.28±1.64cm3),/M).003)。结论:老年人随着动脉粥样硬化程度加重,左主干-前降支和右冠周围脂肪组织容积逐渐增加。第三部分老年人冠状动脉周围脂肪组织中腹脂素的表达及其与冠心病的相关性研究目的:通过比较冠心病和非冠心病患者冠状动脉周围脂肪组织及心脏周围其它部分脂肪组织中腹脂素基因和蛋白的表达,旨在探讨冠状动脉周围脂肪组织中腹脂素的表达与冠心病的相关性。方法:15例体型正常行心外科手术的老年病人,其中9例为冠状动脉旁路手术(CABG),6例为瓣膜置换或先天性心脏病手术。术中留取胸壁皮下脂肪组织、心包脂肪组织、心肌脂肪、冠状动脉周围脂肪。Real-time PCR检测脂肪组织中腹脂素基因转录水平,Western blot检测脂肪组织中腹脂素蛋白表达水平;免疫组织化学染色分析脂肪细胞中腹脂素表达情况。结果:免疫组化结果显示冠状动脉周围脂肪组织中腹脂素蛋白表达明显高于其它部位(胸部皮下脂肪、心包脂肪和右室游离壁脂肪[心肌脂肪]),且冠心病患者冠状动脉周围脂肪组织中腹脂素蛋白含量明显髙于非冠心病患者。Real-time PCR结果显示胸部皮下脂肪、心包脂肪、右室游离壁脂肪(心肌脂肪)和冠状动脉周围脂肪组织中均有腹脂素基因mRM转录。其中冠状动脉周围脂肪组织有较高的腹脂素mRNA转录水平(p〈0.01);冠心病组患者冠状动脉周围脂肪组织中腹脂素mRNA高于非冠心病组患者,分别为[(3.22±0.31)和(2.31±0.17),(p<0.01)];这种差异同样出现在心肌脂肪组织(p〈0.01)和皮下脂肪组织(p〈0.05);但在心包脂肪组织中,腹脂素mRM在两组之间未见明显差异(p>0.05)。blot结果显示,冠状动脉周围脂肪组织中腹脂素蛋白表达均高于胸部皮下脂肪、心包脂肪和心肌脂肪,且冠心病组患者冠状动脉周围脂肪组织腹脂素蛋白表达高于非冠心病组(P-0.001),这种差异同样出现在皮下脂肪组织和心肌脂肪组织(p=0.006和0.008)!但在心包脂肪组织中未见明显差异(p=0.37)。结论:冠状动脉周围脂肪组织中腹脂素mRNA及蛋白表达均高于胸部皮下脂肪、心包脂肪和心肌脂肪组织;冠状动脉周围脂肪组织中腹脂素mRNA和蛋白表达的异常增髙与冠心病有一定相关性。第四部分腹脂素对冠状动脉内皮细胞活力及VCAM-1表达的作用目的:探讨时间-剂量对腹脂素影响冠状动脉内皮细胞活力的作用,以及腹脂素影响冠状动脉内皮细胞VCAM-1表达的时间效应。方法:体外培养人冠状动脉内皮细胞,给予不同浓度腹脂素(Ong/ml,lOng/ml,50ng/ml,lOOng/ml,200ng/inl,400ng/inl)干预不同时间,MTT比色法观察腹脂素对冠状动脉内皮细胞活力的影响,western blot法检测腹脂素对冠状动脉内皮细胞VCM-1蛋白表达的影晌。结果:0ng/ml-200ng/ml腹脂素组冠状动脉内皮细胞活力从0h-48h持续增强,0D490值持续增高;其中50ng/ml-200ng/inl组24h和48h增长幅度均略低于同时间空白对照组和lOng/ml组;400ng/ml腹脂素组冠状动脉内皮活力增长缓慢,且在24h和48h时呈现下降趋势。200ng/ml腹脂素剌激冠状动脉内皮细胞24h时,VCAM-1蛋白表达量达到最大值。结论:低中浓度腹脂素可以增加冠状动脉内皮细胞活力,且呈时间依赖,高浓度(400ng/ml)腹脂素对冠状动脉内皮细胞活力有一定的抑制作用。腹脂素可以诱导冠状动脉内皮细胞表达VCAM-1,在24小时达到高峰。第五部分腹脂素对冠状动脉内皮细胞损伤作用的机制及干预途径目的:探讨腹脂素对冠状动脉内皮细胞损伤的作用机制以及腹脂素抑制剂(FK866)、NF-KB抑制剂(BAY11-7082)和阿托伐他汀对其的保护作用。方法:体外培养人冠状动脉内皮细胞,加药物分组为腹脂素组:腹脂素200ng/ml;腹脂素拮抗剂(FK866)组:FK866 10nmol+腹脂素200ng/ml;NF-KB拮抗剂(BAY 11-7082)组:BAY11-7082 50 umol+腹脂素200ng/ml;阿托伐他汀组:阿托伐他汀lOumol+腹脂素200ng/ml;空白对照组:仅给予常规培养液。MTT检测法测定冠状动脉内皮细胞增殖活力;划痕试验计算细胞迁移数量;比色法测定细胞中活性氧含量;ELISA法测定细胞中IL-6和IL-8含量;Real-time PCR法测定冠状动脉内皮细胞中NO、ICAM-K VCAM-1、NF-k B、ERKmRNA表达;Western blot法测定细胞中NO、ICAM-1、VCAM-1、NF-kB、ERK、P-ERK蛋白的表达;免疫突光检测P65-NF-KB的表达。结果:1)对冠状动脉内皮细胞增殖的作用:腹脂素可以增强冠状动脉内皮细胞增殖活力,腹脂素拮抗剂、NF-kB拮抗剂和阿托伐他汀均可抑制腹脂素所致冠状动脉内皮细胞增殖,其中阿托伐他汀的抑制作用最强,腹脂素诘抗剂和NF-K B抬抗剂的抑制作用相仿;2)对冠状动脉内皮细胞ROS、IL-6、IL-8和ICAM-1、VCAM-lmRNA表达的影响:腹脂素可以增高冠状动脉内皮细胞中ROS、IL-6、IL-8的表达,腹脂素拮抗剂、NF-KB拮抗剂和阿托伐他汀均明显降低腹脂素诱导的冠状动脉内皮细胞炎症因子表达,其中腹脂素抑制作用最强;3)对冠状动脉内皮细胞薪附因子ICAM-1、VCAM-lmRNA和蛋白表达的影响:腹脂素显著增加冠状动脉内皮细胞中ICAM-1、VCAM-ImRNA和蛋白的表达,腹脂素措抗剂、NF-KB捨抗剂和阿托伐他汀均明显降低腹脂素诱导的冠状动脉内皮细胞薪附因子mRNA和蛋白的表达,其中腹脂素抑制剂作用最强;4)对冠状动脉内皮细胞eNOS mRNA和蛋白表达的影响:腹脂素可以抑制冠状动脉内皮细胞中eNOSmRNA表达;腹脂素拮抗剂、NF-KB措抗剂和阿托伐他汀可以逆转腹脂素对内皮细胞eNOS mRNA的抑制作用,其中腹脂素拮抗剂的逆转作用最强;5)对冠状动脉内皮细胞NF-kB途径的作用:腹脂素可以增强冠状动脉内皮细胞中P65-NF-KB tnRNA和蛋白表达的劳光强度,三种干预方式均可抑制腹脂素所致的P65-NF-KB mRNA和蛋白表达,其中NF-KB抑制剂的抑制作用最强;6)对冠状动脉内皮细胞ERK信号通路的作用:腹脂素可以增强冠状动脉内皮细胞中ERK mRNA表达和P-ERK蛋白表达,但ERK蛋白表达不增加,三种干预方式均可抑制ERKmRNA表达和P-ERI(蛋白表达;7)对冠状动脉内皮细胞迁移的作用:腹脂素处理明显增强冠状动脉内皮细胞迁移数量,三种干预方式均可抑制腹脂素诱导的冠状动脉内皮细胞迁移,其中腹脂素抑制剂对细胞迁移的抑制作用最强。结论:腹脂素可以通过激活ERK信号通路,活化核转录因子NF-K B途径,激活冠状动脉内皮细胞炎症反应,损伤冠状动脉内皮细胞。腹脂素抑制剂,NF-kB抑制剂和阿托伐他汀可以通过抑制腹脂素激活的细胞内ERK通路,下调NF-kB活化,从而发挥抑制内皮细胞炎症反应和细胞增殖迁移的作用,保护冠状动脉内皮细胞。FK866可能存在ERK/NF-kB途径以外的保护冠状动脉内皮细胞损伤的作用。