甲型流感病毒是一种具有高度变异性和传染性的呼吸道病原体。由于其具有较强的传染能力,可造成每年季节性流行甚至偶尔的世界范围内大流行,对人类的健康和社会的安全造成了巨大的威胁。接种流感疫苗是我们预防流感的重要方法之一。由于流感疫苗只能预防而不能治疗流感,且面对新型的流感病毒时,存在严重的滞后性。因此,使用药物治疗仍然是我们主要的抗流感病毒的方法。目前,M2离子通道阻滞剂和NA抑制剂是我们治疗流感常用的药物。但由于耐药毒株的出现,药物的使用受到了限制。因此,寻找新型高效的抗流感病毒药物是十分迫切的。本文通过对系列丁烯内酯类化合物进行抗流感病毒活性筛选,寻找具有潜力的抗流感病毒化合物,探究其抗病毒活性及作用机制,为抗病毒的研发提供新方向和思路。首先,在细胞水平上对系列丁烯内酯类化合物进行抗流感病毒活性筛选。采用MTT的方法检测化合物对MDCK的细胞毒性,计算出半数中毒浓度(CC50);使用MTT和CPE相结合的方法检测化合物对A/Weiss/43（H1N1）株的抗病毒活性,并计算出半数有效浓度(EC50);计算得到SI。依据EC50、CC50和SI,筛选出抗流感病毒活性好、细胞毒性小的化合物。随后,在细胞水平上,探究筛选出的化合物的抗病毒活性及作用机制。采用MTT方法检测化合物对不同亚型流感病毒的抑制作用;使用Western Blotting、免疫荧光、q RT-PCR实验检测化合物对流感病毒复制的影响;采用三种不同的加药方式研究化合物的作用方式;采用阶段加药实验探究化合物作用阶段;使用NA筛选试剂盒和血凝抑制实验检测化合物对NA和HA的影响;采用流式细胞术检测化合物对病毒感染引起细胞凋亡的影响;使用Western Blotting实验检测化合物对凋亡通路相关蛋白的影响;使用q RT-PCR方法评价化合物对流感病毒介导的炎症因子的影响。最后,采用流感病毒感染小鼠模型,进一步研究化合物在体内的抗病毒活性及作用机制。将小鼠分为7组,每天灌胃给药,连续给药6天。每天观察记录小鼠的临床症状及体重变化;通过测定肺指数检测化合物对病毒引起的肺损伤的影响;使用HE染色实验检测化合物对流感病毒感染的小鼠肺组织病理变化的影响;采用免疫组化和q RT-PCR实验检测化合物对小鼠肺组织中病毒NP表达的影响;使用q RT-PCR实验进一步探究化合物在体内对流感病毒介导的炎症反应的影响;通过血液生化指标的测定结果初步评价化合物的安全性。结果表明,通过对系列丁烯内酯类化合物在细胞水平上进行抗流感病毒活性筛选,发现丁烯内酯类化合物3D抗流感病毒活性高、细胞毒性小,可进行下一步研究。体外实验表明,3D对不同亚型的流感病毒均有较好的抑制作用;能够抑制病毒基因和蛋白的表达;具有直接阻断和治疗作用;主要在病毒复制周期的早期阶段抑制病毒的复制;对NA的活性和HA的功能没有影响;通过线粒体途径抑制流感病毒诱导的细胞凋亡;抑制病毒激活的TLR3和RIG-I信号通路,具有一定的抗炎活性。体内实验表明,3D能够缓解病毒感染引起的毛发粗糙耸立、运动迟缓、食欲下降、呼吸沉重及体重下降的临床症状;减少病毒在肺组织中的复制;改善病毒引起的肺损伤和肺部炎症反应;通过抑制TLR3、TLR7和RIG-I信号通路调节炎症因子的表达,降低炎症损伤;并且对肝功能和肾功能无明显的毒副作用,安全性较高。因此,3D对甲型流感病毒有较好的抑制作用。