猪带绦虫六钩蚴45W-4B和TSOL18基因的克隆、表达及免疫原性分析

来源 :新疆农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lurenjia1983
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收集成熟的猪带绦虫虫卵,经孵化和激活后,提取六钩蚴总RNA。根据蛋白质专家系统对蛋白结构的预测结果,设计特异性引物,通过PCR扩增截去45W-4B基因的N端信号肽和C端疏水氨基酸序列以提高抗原的稳定性和可溶性,克隆出45W-4B和TSOL18基因,分析比较与国外报道的猪带绦虫45W-4B和TSOL18相应片段的同源性分别为99.7%和99.5%。将基因克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,在大肠杆菌BL21中以GST融合蛋白的形式表达,SDS—PAGE分析证明:45W-4B表达产物约为40ku的融合蛋白,主要呈可溶性表达:TSOL18表达产物约为42ku的融合蛋白,主要以包涵体形式存在。经凝胶扫描、Gel-Pro Analyzer分析,45W-4B表达量约占菌体蛋白的35%,TSOL18表达量约占菌体蛋白的25%。Western blot分析表明可两种重组抗原能与猪囊尾蚴血清反应,说明两种重组抗原具有良好的免疫反应活性。 分别用纯化的GST、GST-TSOL18、GST-45W-4B和猪囊虫全虫粗制抗原作为抗原,以206为佐剂制成疫苗,对猪进行了两批免疫保护性试验。结果表明,免疫后15d抗体水平开始上升,在首次免疫后50d左右达到峰值,且至少在免疫后90d内保持阳性水平。外周血淋巴细胞略有增殖,在感染后10d迅速升高。第一次试验在感染后93d剖检猪,TSOL18和45W-4B免疫组的减虫率分别达94%和95%,与猪囊虫全虫粗制抗原免疫组减虫率为92%的保护效果相当。第二次试验,抗原保存3个月后进行免疫,感染后70d剖检猪,45W-4B免疫组的减虫率达97%,完全保护率也达60%,TSOL18免疫组的减虫率为44.4%。该研究成功克隆并高效表达TSOL18和45W-4B重组抗原,并证明这两种抗原具有良好的免疫保护作用。
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