柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16, CoxA16)是引起儿童手足口病(Hand, Foot and Mouth Disease, HFMD)的主要病原之一。大多研究显示HFMD重症及死亡病例多由肠道病毒71型(Enterovirus71, EV71)引起,因而对CoxA16研究相对较少。近年来,越来越多的研究指出CoxA16除引起HFMD普通病例外,也能引起心肌炎、心包炎、难治性休克及致死性肺炎等重症病例,因此针对CoxA16疫苗研发及病原学诊断的研究在HFMD的公共卫生防控体系中具有重要的意义。建立一套灵敏、特异、稳定、重复性好的病原检测体系是CoxA16疫苗研究的关键技术之一,作为一种常规检测病原微生物的方法,ELISA因其快速、灵敏、经济及可规模化的优点广泛应用于病原检测中,同时能够简便地应用于CoxA16流行病学调查和临床病原检测。本研究以多抗为基础建立CoxA16抗原检测的双抗体夹心ELISA法,通过方阵法和单因素法分别对ELISA体系的包被抗体浓度、酶标抗体浓度、包被液、封闭液、封闭时间、样品孵育时间、酶标抗体孵育时间、显色液及显色时间等条件进行优化,确定优化的ELISA检测体系。本研究制备了一套灵敏度参比品、特异性参比品、精密性参比品及抗原含量检测参比品,根据《中华人民共和国药典》二部“药品质量标准分析方法验证指导原则”对检测方法的线性、灵敏度、特异性、精密度和稳定性等技术指标进行验证。最终建立的CoxA16抗原ELISA检测体系在7U/ml-57U/ml范围直线线性关系最佳,决定系数(R2)达0.995以上;最低检测下限为7.1U/ml,可检测到2×102～9×103CCID50活病毒；能检测到10株分离自不同地区的CoxA16病毒,与CoxA16以外的10种肠道病毒无交叉反应；变异系数CV%小于15%。使用荧光PCR、中和法及本研究建立的ELISA抗原检测法检测病毒培养液,显示三种检测结果一致性好；将建立的方法初步应用于CoxA16纯化工艺研究,能够较好的监控病毒出峰时间及病毒抗原含量。