帕金森病(Parkinson’s disease)是以黑质-纹状体多巴胺能神经系统进行性变性为基本病理改变的中枢神经系统变性疾病。内科治疗以口服多巴胺的前体物质-左旋多巴为主要治疗手段，但服用这种药物起初有效，长期服用会出现药效下降和运动障碍等副作用。外科干预治疗也会遇到长期疗效下降和平术风险。目前不断探索和改进的有第三条途径，细胞治疗。用来自于胎脑的胚胎组织移植治疗PD曾被认为是很有希望的治疗手段，但伦理学和组织来源受限等问题极大限制了这种方法的运用。 使用神经前体细胞或神经干细胞治疗将克服以上的困难。神经干细胞具有分化成神经元、少突胶质和星形胶质细胞的功能且能不断自我增殖。有些学者认为使用神经前体细胞这个概念应较干细胞更为准确。其实，前体细胞应比干细胞的潜能局限，而且，“前体”是一个不很严格的术语，指在发育过程中较一个细胞早的任何细胞。目前已有若干实验室在体外成功分离培养中脑神经前体细胞，因此目前的研究焦点已集中到利用神经前体细胞增殖、分化抑制治疗PD。基因治疗是另一条很有前景的治疗手段。 本课题首先在体外分离，培养中脑神经前体细胞，了解神经前体细胞的自我更新和多向分化的特性，为神经前体细胞移植治疗PD提供细胞准备。此外，本实验克隆了Nurr1基因，为PD的Nurr1基因治疗提供基础。 本实验分二个部分： 第一部分 中脑神经前体细胞的体外分离、培养和特性 我们在体外分离培养中脑神经前体细胞并对其特性进行了观察。采用含有丝分裂源表皮生长因子EGF的无血清培养基培养来源于大鼠胚胎E14.5天的中脑神经前体细胞，中脑神经前体细胞呈神经前体细胞特征性标记Nestin免疫阳性，无分化细胞标记。细胞克隆实验证实细胞有自我更新能力。中脑 神经前体细胞在EGF刺激下增殖迅速。当撤去EGF，置于含血清的培养基和 被覆多聚赖氨酸oLL）的培养皿内，中脑神经前体细胞可分化成神经元和星形 胶质细胞。因此我们培养的中脑细胞有增殖，自我更新能力和多向分化潜能 等神经前体细胞特性。 第二部分Nurrl基因的克隆及其在C17．2神经干细胞中的表达 Nurrl属于核受体超家族内的孤儿受体亚家族成员之一，是对TH基因表 达有重要调控作用的转录因子，Nurrl基因敲除的小鼠不能产生中脑DA能神 经元。本研究用 RT—PCR方法获取Nurrl cDNA，并克隆至pcDNA3．lhygro 载体中，经酶切及测序鉴定正确；再将Nurrl基因经Lipofectamine2000转染， 在C17．二神经于细胞中稳定表达，经Western Blot印迹分析、鉴定Nurrl基 因的蛋白表达正确。这为帕金森病的Nurrl基因治疗工作打下基础。