【摘 要】
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目的:本实验通过将p EGFP-N1-Kiss-1重组真核质粒转染至结肠癌SW480细胞,拟探讨Kiss-1基因高表达抑制结肠癌SW480细胞的侵袭能力及机制的初步研究。方法:将质粒p EGFP-N1-Kis
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目的:本实验通过将p EGFP-N1-Kiss-1重组真核质粒转染至结肠癌SW480细胞,拟探讨Kiss-1基因高表达抑制结肠癌SW480细胞的侵袭能力及机制的初步研究。方法:将质粒p EGFP-N1-Kiss-1及空载体质粒p EGFP-N1通过脂质体转染的方式瞬时导入结肠癌SW480细胞,转染48h后检测转染效率,然后采用Transwell侵袭小室实验检测细胞的侵袭能力,Realtime PCR和Western-blot方法分别从基因和蛋白水平检测Kiss-1基因对基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)和基质金属蛋白-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)表达的影响。结果:1)瞬时转染48小时后,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白细胞数,计算转染效率在70%-85%。2)Transwell侵袭小室实验结果证实:实验组穿过基质胶细胞数较空白对照组和阴性对照组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。3)Real-time PCR结果证实:与阴性对照组相比较,Kiss-1基因相对表达量在实验组中增高,MMP-9和MMP-2基因相对表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。4)Western-blot结果证实:相对于空白对照组和阴性对照组,在实验组中Kiss-1高表达,MMP-9和MMP-2蛋白的表达下调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Kiss-1高表达能明显降低结肠癌SW480细胞的侵袭能力和下调MMP-9与MMP-2表达。
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