论文部分内容阅读
目的从《本草纲目》轻身延年药物及其归经角度探析衰老机制,并基于脾肾虚衰角度科学组方,以AD模型大鼠为研究对象,观察补肾健脾开心方对AD模型大鼠学习记忆水平、抗氧化指标(SOD、NOS)和Ngb调控PI3K/Akt通路的影响,探讨补肾健脾开心方对AD模型的干预作用及作用机理,为中医药防治AD提供实验依据,传承并挖掘《本草纲目》的学术价值。方法1.文献研究:以“轻身”、“延年”、“健忘”、“益智”、“归经”等为关键词,梳理《本草纲目》轻身延年药物110多味,根据其主要功效及药物归经,探析人体衰老机制和轻身延年、补益脾肾药物对延缓衰老的意义。并以衰老典型表现痴呆为例,探讨痴呆病因病机和治则治法,阐释补肾健脾益智法防治痴呆的理论依据。2.实验研究:选取3月龄Wistar大鼠70只,皆为雄性。在D-半乳糖皮下注射造成亚急性衰老模型基础上大鼠海马注射Aβ1-42构建拟AD大鼠模型,选取造模成功的Wistar大鼠50只,随机分成5组,即模型组、多奈哌齐组、补肾健脾开心方低剂量组、补肾健脾开心方中剂量组、补肾健脾开心方高剂量组,每组10只。另选同批次Wistar大鼠20只,随机分为正常组和假手术组,每组10只。各组大鼠均按1ml/100g·d灌胃给药,连续28d。采用Morris水迷宫实验观察大鼠的学习记忆能力,化学比色法检测大鼠海马区SOD与NOS含量、免疫组织化学染色法和蛋白质免疫印迹法检测大鼠海马区Ngb及PI3K/Akt通路内的PI3K、Akt等蛋白表达。结果1.在5天的定位航行实验过程中,各组大鼠的逃避潜伏期的趋势总体是下降的,前2天各组间没有显著差异。第3天,模型组大鼠的逃避潜伏期与正常组相比明显延长(P<0.05),补肾健脾开心方高剂量组及多奈哌齐组与模型组相比有显著差异(P<0.05);第4天,模型组大鼠的逃避潜伏期与正常组相比明显延长(P<0.01),多奈哌齐组及补肾健脾开心方高剂量组与模型组相比逃避潜伏期显著缩短(P<0.05);第5天,模型组大鼠的逃避潜伏期与正常组相比明显延长(P<0.01),四个用药组与模型组相比逃避潜伏期显著缩短(P<0.01)。上述结果假手术组与正常组比较无差异。2.在第6d的空间探索实验中发现,除模型组外,其余各组均能依靠线索找到平台位置,其运动轨迹最多位于平台象限,模型组大鼠基本围绕池壁游泳,较少游向平台附近,其运动轨迹随机分布于各象限之中。模型组大鼠与其它各组相比,跨过原平台位置的次数明显下降(P<0.01)。多奈哌齐组、补肾健脾开心方高、中、低剂量组与模型组比显著增多(P<0.01)。其中补肾健脾开心方高、中剂量组与多奈哌齐组比无差异(P>0.05)。3.测得各组氧化相关指标结果提示,与正常组相比,模型组NOS含量明显升高,而SOD含量明显降低(P<0.01)。正常组与假手术组基本无差异(P>0.05)。与模型组比,各治疗组NOS含量结果显著降低,SOD含量结果显著升高,均有显著性差异(P<0.01)。与多奈哌齐组比较,补肾健脾开心方各剂量组SOD与NOS的含量存在差异(P<0.05,P<0.01)。4.免疫组化检测阳性细胞数结果显示,与正常组比,模型组Ngb、PI3K、Akt数量明显降低(P<0.01)。假手术组与正常组基本无差异(P>0.05)。与模型组比,各治疗组Ngb、PI3K、Akt含量结果显著升高,均有显著性差异(P<0.01)。与多奈哌齐组比较,补肾健脾开心方中、高剂量组Ngb、PI3K、Akt含量有显著差异(P<0.05,P<0.01)。平均平均光密度结果表现出基本一致的趋势。5.Western Blot检测结果显示,与正常组比,模型组Ngb、PI3K、Akt数量明显降低(P<0.01)。假手术组与正常组基本无差异(P>0.05)。与模型组比,补肾健脾开心方中、高剂量组Ngb、PI3K、Akt含量结果显著升高,均有显著性差异(P<0.05,P<0.01),补肾健脾开心方低剂量组和多奈哌齐组部分指标有差异(P<0.05。与多奈哌齐组比较,补肾健脾开心方各剂量组Ngb、PI3K、Akt含量有差异(P<0.05,P<0.01)。结论1.基于《本草纲目》轻身延年药物功效和归经分析可知,脾肾虚损是人体衰老和健忘的基本病机,痰浊阻滞是其重要因素。补肾健脾、化痰益智可使身轻体健,延年不老。2.选取《本草纲目》中具延年益智功效的药物合理科学组方补肾健脾开心方能有效改善痴呆(衰老核心症状)模型大鼠的学习记忆水平。3.补肾健脾开心方可有效减少痴呆模型大鼠脑内NOS的含量,增加SOD的含量,增强脑组织的抗氧化能力,改善AD模型大鼠的衰老指征。4.补肾健脾开心方改善痴呆的作用机制可能是通过提高PI3K和Akt蛋白水平,经PI3K/Akt通路调控Ngb从而减轻或修复模型动物脑组织神经元损伤,达到改善其学习记忆障碍的作用。