论文部分内容阅读
百合因其淡雅有致、清香袭人现多用于鲜切花和盆栽。但由于人为破坏,野生百合资源稀少日益严重,建立高效的百合再生体系显得尤为重要。消费者日益增加的需求使得百合多种性状有待改良,百合育种方法较多,但传统育种方法存在一些天然的缺陷,使得必须从分子育种方面寻求突破。现在多通过农杆菌介导基因转入的方法对百合的性状进行改良,虽然已经取得了一些进展,但由于百合属单子叶植物、遗传背景复杂等原因,百合的遗传转化上还存在不少问题,如转化后得到嵌合体比例较高、PCR检测假阳性率高、转化效率低等。本研究利用麝香百合和淡黄花百合为材料,分别对其再生体系进行了研究,并在此基础上通过农杆菌介导的方法对麝香百合进行了目的基因的转化。主要研究结果如下:1.优化了麝香百合的再生体系:麝香百合进行丛生芽发生途径时,以鳞片薄层切片为外植体,其再生最佳培养基:1.5MS+1.0mg/L BA+0.2mg/L NAA+90 g/L蔗糖+7.5g/L琼脂;以鳞片薄层切片和叶片为外植体,诱导麝香百合愈伤组织最佳培养基均为:MS+1.0mg/L NAA+0.2mg/L TDZ+60 g/L蔗糖+7.5g/L琼脂,麝香百合愈伤组织分化培养基为基本MS培养基;进行胚状体发生途径时,以鳞片薄层切片为外植体,诱导麝香百合胚性愈伤组织最佳培养基为:MS+2.0mg/L PIC+0.1mg/L TDZ+60 g/L蔗糖+7.5g/L琼脂。2.优化了淡黄花百合的再生体系:淡黄花百合进行丛生芽发生途径时,以鳞片薄层切片为外植体时,其再生最佳培养基:1.5MS+1.0mg/L BA+0.6mg/L NAA+90g/L蔗糖+7.5g/L琼脂;以鳞片薄层切片为外植体,诱导淡黄花百合愈伤组织最佳培养基:MS+1.0mg/L NAA+0.2mg/L TDZ+60 g/L蔗糖+7.5g/L琼脂。以叶片为外植体,诱导淡黄花百合愈伤组织最佳培养基:MS+0.5mg/L NAA+0.4mg/L TDZ+60 g/L蔗糖+7.5g/L琼脂,淡黄花百合愈伤组织分化培养基同样为基本MS培养基。3.以1080个麝香百合胚性愈伤组织作为受体材料,对目的基因LlDREB1进行了转化,筛选后共得到32株抗性苗,其中6株呈阳性,PCR阳性率为18.8%。