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目的冠状动脉粥样硬化是冠心病的发病基础,高血脂作为重要的环境因素,通过引起冠状动脉内皮细胞功能障碍促进动脉粥样硬化的发生。低密度脂蛋白(ox-LDL)对冠脉内皮的损伤发生贯穿于冠心病的发病整个过程中,最终导致心梗的发生。减少和预防ox-LDL诱导的冠脉内皮细胞损伤对于预防冠心病的发生,降低冠心病的致死率有重要意义。目前,已发现多种Micro-RNA参与冠状动脉粥样硬化的发生和发展,以往发现miR-130a在冠心病患者中表达异常,且在急性心肌梗死后的心肌细胞损伤的作用已明确,我们推测它可能在冠脉内皮功能障碍中同样发挥作用。本研究旨在探讨miR-130a对靶基因PPAR-γ的调控在冠脉内皮细胞的炎症反应的影响,从分子水平为冠状动脉粥样硬化性心脏病的诊疗提供新的研究方向。方法体外培养传代原代人冠脉内皮细胞(HCAECs),(1)使用不同浓度的ox-LDL刺激正常HCAECs 24h,诱导损伤,通过细胞形态学的观察确定损伤模型的建立,使用RTq PCR和蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测不同浓度ox-LDL刺激诱导损伤后冠脉内皮细胞中miR-130a的表达差异及PPAR-γ的mRNA和蛋白表达差异,使用CCK-8法检测ox-LDL刺激浓度与HCAECs活力的关系;(2)通过脂质体转染的方法构建miR-130a低表达、高表达细胞系,给予上述两组细胞系80μg/mL ox-LDL刺激24h。应用RT-q PCR和Westernblot实验检测miR-130a高表达组、低表达组PPAR-γ的表达差异,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测下游炎性因子IL-1β、IL-6及TNF-α的表达变化;(3)引入PPAR-γ激动剂吡格列酮预处理细胞24h后,ox-LDL刺激细胞24h,western blot法检测PPAR-γ的表达变化,CCK-8法检测细胞活性变化,ELISA检测炎性因子IL-1β、IL-6及TNF-α的表达变化,证明PPAR-γ对ox-LDL诱导损伤的HCAECs炎症方面的影响。使用image J软件进行条带灰度分析,SPSS 22.0软件进行统计学分析,计量资料均以均数±标准差表示,P<0.05表示差异具有统计学意义。结果(1)给予ox-LDL刺激24h,CCK-8细胞活性实验证明,与正常冠脉内皮细胞组相比,使用浓度为40μg/mL ox-LDL刺激细胞后,细胞存活率为(91.58±1.37)%,使用浓度为80μg/mL ox-LDL刺激细胞后细胞存活率(84.58±1.14)%,使用浓度为120μg/mL oxLDL刺激细胞后,细胞存活率(62.66±1.94)%,使用浓度为160μg/mL ox-LDL刺激细胞后,细胞存活率为(50.28±1.38)%,各组之间差异具有统计学意义(P<0.01)。表明ox-LDL刺激可降低HCAECs原代冠脉内皮细胞的活性,且呈浓度依赖性。(2)Westernblot、PCR结果表明随着ox-LDL刺激浓度的升高,HCAECs细胞系中miR-130a的表达水平逐渐升高,而PPAR-γ表达水平逐渐减低,各组之间差异具有统计学意义(P<0.01)。(3)与对照组相比,miR-130a mimic组中miR-130a的表达升高,PPAR-γ的mRNA和蛋白表达水平明显降低,miR-130a inhibitor组中miR-130a的表达降低,PPAR-γ的mRNA和蛋白表达水平含量明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。(4)ELISA结果表明,与对照组相比,miR-130a mimic组炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表达均升高,而miR-130a inhibitor组中,HCAECs细胞内的炎症因子降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。(5)药物预处理组与ox-LDL组相比,PPAR-γ蛋白水平表达含量增高,HCAECs细胞活力升高,且炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表达降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论ox-LDL刺激HCAECs可诱导细胞活性下降,同时诱导miR-130a表达上调。低表达miR-130a可促进PPAR-γ的表达,通过下调下游炎性因子的表达,对ox-LDL诱导损伤的HCAECs细胞起到保护作用。本研究首次探讨了miR-130a/PPAR-γ在ox-LDL诱导的原代冠脉内皮细胞(HCAECs)损伤中起到抗炎症作用,为冠心病的分子靶向治疗提供了理论依据。