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纳米材料因其独特的量子尺寸效应、表面效应,被广泛的应用于生物化学方面的研究。其中金纳米颗粒、硅纳米颗粒、磁性纳米材料应用最为广泛。金纳米颗粒和硅纳米颗粒都具有很好的生物兼容性、并且无毒副作用,还可以通过表面基团的修饰偶联上多种生物分子,从而制备生物传感器应用于生物分析检测。其中磁性纳米材料具有磁响应性,在外加磁场的作用下,便于快速聚集和定位。利用这些性质可以将其应用于生物标记与分离、核磁共振成像等方面。 因此,本论文利用纳米颗粒作为生物分子之间的“载体”和“桥梁”,结合免疫分析方法,探究了生物功能化纳米颗粒在荧光免疫分析检测方面的应用。以双酚A为检测对象,采用竞争性免疫分析模式,建立了三种测定双酚A的方法。 双酚A是一种类雌激素化合物。它能够模拟人体内雌激素的作用机制,扰乱人体内正常的代谢过程。但双酚A做为聚碳酸酯的重要原料,常用于制造食品包装内侧涂层、电线电路接头、电子元器件等。因此人们常常能够接触到它。但研究表明,双酚A长期暴露于人体所处的周围环境中,会对婴幼儿的发育、人体内分泌代谢产生巨大的危害。因此,以双酚A为研究对象具有十分重要的应用价值。 全文分为以下三部分: 一、基于生物功能化的金纳米颗粒的荧光免疫分析用于双酚A的检测 本实验将抗双酚A抗体与巯基修饰的DNA分别通过静电吸附和共价结合的方式结合到纳米金粒子表面,形成兼具分子识别功能和信号放大作用的响应平台。在固相载体上包被完全抗原,完全抗原与待测样品中的半抗原能够同时竞争结合抗双酚 A抗体,形成竞争型免疫分析模式。从而建立了一种检测双酚A的荧光免疫分析方法。实验中探究了具有最强响应信号时的DNA和抗体的结合比,离子强度、pH、温度对生物功能化纳米颗粒的影响。在最优条件下,该方法在1.0×10-2 ng/L-1.0×103 ng/L范围内具有良好的线性关系,线性回归方程为△F=58.23 lg C+243.6,方法的检出限为3.4×10-3 ng/L。并将该方法用于乳制品中双酚A含量的测定,结果令人满意。 二、基于生物纳米硅球和功能化胶体金荧光猝灭效应的免疫分析方法研究 本实验将表面富集有荧光素标记DNA和抗BPA抗体的硅纳米颗粒作为荧光信号放大体系,表面有 BPA完全抗原的金纳米颗粒作为荧光信号的猝灭剂。利用荧光猝灭原理,建立了一种在均相体系中检测双酚 A的方法。实验中对生物功能化硅纳米颗粒的制备进行了优化条件。在最优的条件下,该方法在2.0 ng/L-1.0×103 ng/L范围内有良好的线性关系,线性回归方程为△F=193.6 lg C+146.7,方法的检出限为1.44 ng/L。并将该方法用于食品包装等容器中双酚A含量的测定,取得了令人满意的结果。 三、基于生物功能化纳米硅球和功能化磁球的荧光免疫分析用于双酚A的检测 本实验以磁性纳米颗粒作为包被原的固相载体,生物功能化的硅纳米颗粒作为信号响应平台。采用竞争型免疫分析模式,在外加磁场的作用下,定向分离待检测物,实现快速检测的目的。实验过程中,对磁性纳米球上包被原的浓度、生物功能化磁球的浓度进行了优化。在最优的条件下,该方法在5.0 ng/L-1.0×103 ng/L范围内有良好的线性关系,线性回归方程为△F=284.4 lg C+854.1,方法的检出限为4.14ng/L,线性相关系数R为0.9820。并将该方法用于湖水中BPA测定,取得了令人满意的结果。