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目的：采用功能性抗体库技术已筛选出的抗肺癌单抗13C9,确定其识别的抗原在肺癌细胞和组织中的表达,测定该单抗抑制肺癌生长的能力,进一步鉴定其识别的抗原蛋白。研究该抗原蛋白的表达与肺癌临床参数的关系,以期为肺癌靶向治疗提供有价值的分子靶位和治疗剂。方法：采用细胞免疫荧光、免疫组织化学检测13C9单抗识别的抗原蛋白在肺癌细胞及组织中的表达和定位；ELISA测定13C9单抗的产量和亚型；裸鼠体内移植瘤治疗实验和体外肺癌细胞增殖实验,评价13C9单抗对肺癌细胞生长的作用；采用斑点杂交优化、RIPA法提取13C9单抗识别的抗原蛋白,行蛋白印迹(Western blotting)、免疫沉淀、MALDI-TOF-PMF质谱技术,鉴定该抗原蛋白。收集临床肺癌标本,应用免疫组织化学检测M蛋白的表达,分析其与肺癌临床病理参数的相关性。结果：细胞免疫荧光检测13C9单抗识别的抗原在肺癌12种固定细胞中表达阳性率达90%以上,强度为强阳性(+++)；在活细胞中,其识别的抗原表达于细胞膜上。免疫组织化学检测结果：174例配对组织中,13C9单抗识别的抗原在肺癌组织中阳性表达率87.4%,在配对癌旁组织中阳性表达率16.7%,差异非常显著(t=3.5555E-48,P<0.01)。培养杂交瘤细胞产生13C9单抗,ELISA测定其产量为4.38ug/ml,亚型为小鼠IgM、k型。裸鼠体内移植瘤抑制实验,13C9单抗抑瘤率达63.29%,与对照组比较,差异显著(P=0.01,P<0.05)。斑点杂交优化13C9单抗识别的抗原蛋白主要定位于细胞膜,经RIPA法提取、免疫沉淀、电泳后切胶行MALDI-TOF-PMF质谱技术鉴定,结果13C9单抗识别的抗原蛋白为M蛋白,分子量为226KD。商业化抗体进行质谱结果回证,证明13C9单抗与商业化的抗体识别的抗原蛋白同为M蛋白。对于肺癌临床标本的免疫组织化学检测及其与肺癌临床病理参数的相关性的分析结果显示,在331例肺癌组织中,M蛋白的表达在鳞癌组织高于在腺癌组织(P=0.000,P<0.01),在T3+T4期肺组织高于T1+T2期肺组织(P=0.001,P<0.01)。在161例鳞癌中M蛋白的表达随T分期的增加而增强；在137例腺癌中M蛋白的表达随分化程度的减低而增强。结论：本实验结果证明：①13C9单抗为功能性单抗,其识别的抗原在肺癌多种细胞和组织中表达,对裸鼠体内移植瘤具有明显的抑制作用。②13C9单抗识别的抗原M蛋白为肺癌功能性抗原蛋白,分子量为226KD,主要定位于肺癌细胞膜。③M蛋白的表达与肺癌的类型及临床病理参数存在相关性：在肺鳞癌中的表达高于肺腺癌；在肺鳞癌中,M蛋白的表达与T分期呈正相关；在肺腺癌中,M蛋白的表达与分化程度呈负相关。本研究有望为研制新的肺癌靶向治疗剂和治疗靶标提供新的实验依据。