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研究背景创面愈合是多种愈合相关细胞相互协调统一,发挥各自的生物学功能,并依靠细胞、细胞外基质以及细胞因子和生长因子间相互作用,完成修复各种因素对机体造成的损伤的过程。血管新生是创面愈合过程中不可或缺的关键因素,形态和功能完整的血管,可为创面提供充足的营养、氧气及生物活性物质并可以及时清除组织、细胞产生的代谢废物。血管管腔由单层内皮细胞相互连接形成,同时也构成微血管屏障。微血管屏障允许小分子物质自由通过,进行物质交换,但限制白蛋白等大分子自由通过。血管损伤时,微血管屏障功能受损,此时大分子自由通过微血管屏障,造成血管渗漏。血管渗漏常见于创伤早期,任何造成血管形态或功能完整破坏的因素都能引起血管渗漏,造成创面水肿,创面持续性异常渗漏是创面愈合不良的标志,常见于难愈创面。因此抑制创面微血管渗漏,调节微血管通透性对创面愈合具有重要临床意义。血管周细胞（Vascular Pericyte）是一种构成血管壁的细胞,通过覆盖血管内皮间间隙以及旁分泌途径,发挥调节血管通透性的功能,是调节血管新生、重塑、通透性不可缺少的细胞。血管周细胞通过覆盖血管内皮细胞相互连接时的间隙,直接发挥调节作用;还可通过旁分泌血管生成素-1（Angiopoietin-1,Ang-1）,间接发挥调节作用。Ang-1是主要由血管周细胞分泌的一种细胞因子,通过与血管生成素-2竞争血管内皮细胞表面受体Tie-2,发挥维护血管完整性、减少血管渗出的发生的作用。因此,血管周细胞是调节创面微血管通透性,加速创面愈合的关键。血管损伤引起血管渗漏的同时,由于无法及时运输充足的氧气、清除代谢废物、损伤等引起的局部炎症等,常使创面处于缺氧环境。缺氧诱导因子-1α（Hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）是缺氧环境下最关键的调节因子,常氧下迅速被降解,缺氧环境下稳定表达,与表达于核内的HIF-1β亚基形成二聚体,通过调控下游包括血管内皮生长因子在内的数百个基因从而调控缺氧环境下炎症、凋亡等生物过程。氯化钴（Cobalt chloride）是目前国内外常用建立体外缺氧模型的缺氧诱导剂。氯化钴通过的Co2+置换Fe2+从而影响氧利用,造成缺氧环境,此外还可抑制HIF-1α降解。血管损伤,微血管屏障受损,造成血管渗出的同时,创面局部组织、血管包括血管周细胞也处于缺氧状态。缺氧环境下,HIF-1α表达增高,使其下游基因VEGF上调。同时,血管周细胞分泌的Ang-1可以抑制包括VEGF引起的血管通透性增高。因而,本研究通过检测缺氧环境对HIF-1α、VEGF和Ang-1表达影响,探究缺氧环境下HIF-1α和VEGF对Ang-1表达的影响,为临床创面愈合提供新思路。研究目的探讨氯化钴诱导低氧对血管周细胞Ang-1表达的影响。研究方法通过氯化钴诱导细胞低氧模型验证低氧环境对血管周细胞HIF-1α、VEGF及Ang-1表达影响。取原代人脑血管周细胞（Human brain vascular pericyte,HBVP）复苏后扩增冻存,实验时取冻存HBVP,复苏后,使用血管周细胞培养基（Pericyte Medium,PM）体外培养血管周细胞,实验时取第3-5代HBVP待细胞长满100mm培养皿80-90%时予不同氯化钴干预24h,浓度分别为0（对照组）,50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、300μmol/L、400μmol/L。提取样本后分别通过Western-blot检测HIF-1α蛋白表达、RT-PCR法检测HIF-1α、Ang-1 m RNA合成以及ELISA法检测VEGF、Ang-1蛋白分泌。研究结果实验结果表明（1）CoCl2诱导低氧促进血管周细胞HIF-1α、VEGF蛋白表达,HIF-1α蛋白表达随氯化钴浓度升高呈现单峰曲线,峰值出现在200μmol/L;同时低氧抑制血管周细胞HIF-1αm RNA合成,且具有浓度依赖性;（2）低氧环境血管周细胞Ang-1蛋白表达和m RNA合成受到影响,Ang-1蛋白表达和m RNA合成随氯化钴浓度升高呈现单峰曲线,峰值出现在100μmol/L,且随后显著下降低于对照组。结论CoCl2诱导低氧可影响血管周细胞Ang-1表达。