寡肽转运蛋白PepT2(1-134)的原核表达与氨甲环酸药物分子的修饰

来源 :河南工业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:hondaboy
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PepT2寡肽转运蛋白一种高亲和力、低容量的转运载体,它能够转运二肽、三肽以及许多仿肽类药物,如β-内酰胺抗生素、血管紧张素转换酶抑制剂、贝他定等。与游离氨基酸的吸收机制不同,PepT2主要是依赖H+与非耗能性Na+/H+泵转运系统逆浓度进行,这有利于小肽的吸收。基于这些特点,我们可以将一些难以被吸收的药物修饰成小肽类似物,从而提高药物的利用率。由于PepT2基因序列中稀有密码子含量太高(12%)不利于全长蛋白的表达,我们选择了PepT2中稀有密码子含量较少的片段来进行表达。首先将构建的PET30a(+)-PepT2(1-134)重组质粒转入BL21(DE3);然后在37℃下用0.5mmol/LIPTG诱导表达3小时,SDS-PAGE检测结果显示,在19KDa处有一条明显的蛋白条带,说明PET30a(+)-PepT2(1-134)转化菌经IPTG诱导后能够表达PepT2(1-134)蛋白,这为我们以后研究寡肽转运蛋白的性质提供了基础。利用固相合成法合成了氨甲环酰组氨酸、氨甲环酰谷氨酰苯丙氨酸、氨甲环酰谷氨酰赖氨酸、氨甲环酰丝氨酰酪氨酸、氨甲环酰亮氨酰组氨酸、氨甲环酰丝氨酰苯丙氨酸六种氨甲环酸衍生物,并对合成产物进行了ESI-MS、~1HNMR表征。利用紫外光谱法研究了氨甲环酸衍生物与DNA的相互作用,考察了浓度对相互作用的影响。结果表明,当氨甲环酸衍生物与DNA相互作用后体系的紫外吸收光谱成减色效应,二者之间相互作用模式主要是静电结合。
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