论文部分内容阅读
目的：1.研究lncRNA HEIG在胃癌中潜在的生物学功能,并验证其体内的致癌活性。2.筛选lncRNA HEIG的靶基因,验证HEIG能否通过作用于相关的信号通路调控其靶基因表达,以揭示HEIG在胃癌细胞增殖、凋亡与侵袭、迁移中的作用机制。方法：1.应用lncRNA芯片技术对胃癌患者癌组织与配对癌旁组织样本的lncRNA以及mRNA表达谱进行定量检测,筛选与胃癌相关的差异表达lncRNA及mRNA。应用qPCR技术验证lncRNA芯片检测结果可靠性。应用生物信息学技术对差异表达的lncRNA进行靶基因预测并与差异表达的nRNA进行关联分析。同时,结合GO分析以及Pathway分析,对胃癌相关lncRNA靶基因进行功能预测及信号通路分析。2.对HEIG基因进行过表达以及RNAi,综合运用MTS法细胞增殖检测、平板克隆形成实验、流式细胞术、TUNE L法细胞凋亡检测以及Transwell法细胞侵袭与迁移检测等研究技术,对HEIG在胃癌中潜在生物学功能进行分析,通过NOD/SCID小鼠胃癌异种移植瘤动物实验验证lncRNA HEIG在体内的致癌活性。3.应用人凋亡qPCR芯片及人肿瘤转移qPCR芯片,筛选lncRNAHEIG作用的靶基因并分析其相关信号通路。应用qPCR和Western blot技术验证HEIG对其靶基因及相关信号通路的调控作用。结果：1. lncRNA和mRNA表达谱数据表明,2621种lncRNA以及3121种mRNA在胃癌组织与癌旁组织中呈差异表达(差异表达倍数≥2)。qPCR检测结果显示,8种随机选择的差异表达lncRNA以及8种差异表达的mRNA,其表达趋势与lncRNA芯片检测结果一致。进而构建了胃癌相关的lncRNA-mRNA调控网络。Pathway分析表明,lncRNA的靶基因主要富集在P53信号通路、凋亡信号通路以及Jak-STAT信号通路等7种不同的信号通路中。2.通过qPCR技术,发现lncRN A芯片筛选得到的新型lncRNA HEIG在胃癌组织和4种胃癌细胞中异常高表达。HEIG在SGC-7901和HGC-27细胞内均可促进细胞增殖、提高细胞克隆形成能力、抑制细胞凋亡以及促进细胞侵袭和迁移。NOD/SCID、鼠胃癌异种移植瘤动物实验也验证了lncRNA HEIG在体内具有潜在的致癌活性。3.利用qPCR芯片技术,我们分别筛选到7个可能与胃癌细胞凋亡相关的HEIG靶基因,以及3个可能与胃癌转移相关的HEIG靶基因；其中PI3K、PTEN、AKT、Bcl-2以及Bcl-XL 5个靶基因主要位于PI3K-AKT信号通路上。我们在SGC-7901以及HGC-27细胞内通过qPCR技术,验证了lncRNA HEIG对这些靶基因的调控作用。在lncRNA HEIG过表达的同时进行PTEN过表达,发现caspase-3、caspase-6、 Bcl-2、Bcl-XL、MMP2和MMP9的mRNA和蛋白表达水平以及AKT的磷酸化水平均发生了逆转。结论：lncRNA HEIG在胃癌中具有潜在的致癌活性,它可以通过作用于PI3K-AKT信号通路从而抑制胃癌细胞凋亡和促进细胞侵袭和迁移。