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目的:建立小鼠颈动脉套管术后动脉粥样硬化易损斑块(VP)模型,模拟临床中动脉粥样硬化易损斑块,研究豁痰解毒通络方对此模型的干预作用,探讨豁痰解毒通络方是否可能通过调节内质网自噬-NLRP3炎性小体信号通路抑制动脉粥样硬化易损斑块的进展。方法:体内实验:12只雄性C57BL/6J小鼠和36只雄性ApoE-/-小鼠,分为四组,每组12只,分别为假手术组(C56BL/J6)、模型组(ApoE-/-)、中药组(ApoE-/-)、西药组(ApoE-/-)。除假手术外,其余各组给予颈动脉套管术+含0.25%胆固醇和15%可可脂的高脂饲料喂养8周建立小鼠颈动脉粥样硬化易损斑块模型。中药组给予豁痰解毒通络方灌胃,西药组给予依洛尤单抗注射液皮下注射,假手术组、模型组小鼠给予等体积蒸馏水灌胃,各组给药后8周取材。1.小鼠体重检测:各组小鼠每周进行体重检测并记录。2.酶联免疫吸附测定法(ELISA):检测各组小鼠血清中甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)及高密度脂蛋白(HDL)含量;及血清中白介素-1β(IL-1β)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量。3.组织病理学染色:HE染色法检测每组小鼠颈动脉内膜增生情况;Masson染色检测颈动脉各层胶原纤维表达情况;免疫组织化学染色方法检测各组小鼠颈动脉基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达情况。4.实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测:各组小鼠颈动脉组织中炎性反应相关指标 NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18、TNF-α 的 mRNA 表达水平;各组小鼠颈动脉组织中内质网自噬相关指标GRP78、ULK1、mTOR、Beclin1、Atg7、LC3B、P62的mRNA表达水平。5.蛋白免疫印迹法(Western blot)检测:炎性指标:NLRP3、ASC、Caspase-1 及内质网自噬标志分子 mTOR、Beclin1、ATG7、LC3B、P62在小鼠颈动脉组织中的蛋白表达水平。体外实验:脂多糖(LPS)诱导小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7建立细胞炎症损伤模型后,将细胞分为对照组,LPS组,中药组(豁痰解毒通络方)及西药组(依洛尤单抗注射液),采用CCK-8法检测RAW264.7细胞的活性;蛋白免疫印迹法检测各组细胞中NLRP3、Caspase-1、Beclin1、LC3B及P62蛋白表达水平。结果:1.小鼠体重测量结果示:与假手术组相比,模型组小鼠每周平均体重显著增加,结果具有统计学差异(P<0.05),且每周体重上升趋势明显;与模型组相比较,中药组及西药组小鼠体重显著降低(P<0.05),且每周体重上升趋势低于模型组。2.ELISA检测结果示:模型组小鼠血清中甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)与假手术组相比显著升高(P<0.01),高密度脂蛋白(HDL)与假手术组相比无统计学差异(P>0.05);中药组及西药组小鼠血清中TG、LDL与模型组相比显著降低(P<0.01),HDL含量与模型组相比无统计学差异(P>0.05)。与假手术组相比,模型组小鼠血清中炎性因子IL-1β及TNF-α含量显著升高(P<0.01),给予中药及西药后各组小鼠血清中IL-1β及TNF-α含量与模型组相比显著降低(P<0.01),结果具有统计学意义。3.病理学检测:HE染色结果示:与假手术相比较,模型组小鼠颈动脉内膜增厚显著,内膜面积百分比增高显著(P<0.01),中药组及西药组小鼠颈动脉内膜增厚情况与模型组相比显著减轻,内膜面积百分比显著减少(P<0.01);与模型组相比,中药组及西药组内膜增厚情况有所减轻,内膜面积百分比显著降低(P<0.01)。Masson染色结果示:假手术组颈总动脉Masson染色后呈现以红色的肌纤维为主,未见明显的胶原纤维沉积,模型组蓝染情况显著增强(P<0.01),胶原纤维沉积情况显著,中药组及西药组都有少量蓝染情况,但胶原纤维沉积情况较模型组相比减轻(P<0.01)。免疫组化检测结果示:假手术组MMP-9的表达呈阴性,细胞核染色基本为蓝色,模型组与假手术组比较,内膜明显增厚,新生内膜中MMP-9表达呈阳性,可见大量棕黄色颗粒,中药组及西药组可见少量棕黄色颗粒,MMP-9表达与模型组相比显著减少。4.RT-PCR检测结果示:与假手术组相比,模型组小鼠颈总动脉组织中NLRP3炎性小体相关分子NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18、TNF-α表达显著升高(P<0.01),内质网自噬相关指标GRP78、ULK1、Beclin1、Atg7、LC3B,表达显著降低(P<0.01),mTOR、P62表达升高(P<0.01);中药组、西药组与模型组相比,NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18、TNF-αmRNA 表达显著下降(P<0.01),GRP78、ULK1、Beclin1、Atg7、LC3B 表达显著升高(P<0.01),mTOR与P62表达下降(P<0.01)。5.Western blot结果示:与假手术相比,模型组小鼠颈总动脉组织中NLRP3炎性小体相关分子NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18、TNF-α表达显著升高(P<0.01),内质网自噬相关指标ULK1、Beclin1、Atg7、LC3B,表达显著降低(P<0.01),mTOR、P62表达升高(P<0.01);中药组、西药组与模型组相比,NLRP3、ASC、Caspase-1 蛋白表达显著下降(P<0.01),ULK1、Beclin1、Atg7、LC3B表达显著升高(P<0.01),mTOR与P62表达下降(P<0.01)。6.体外实验:豁痰解毒通络方能够提高LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7细胞活性(P<0.01),能够提高细胞自噬水平抑制NLRP3炎性小体的过表达。结论:1.实验成功建立了小鼠动脉粥样硬化易损斑块模型,成模率高,病变恒定,可用于模仿人类动脉粥样硬化易损斑块的机制研究。2.豁痰解毒通络方能够明显抑制小鼠颈动脉粥样硬化易损斑块进展,对颈动脉套管术后的内膜增生及斑块的易损性有明显的抑制作用。3.豁痰解毒通络方能够降低动脉粥样硬化易损斑块模型小鼠体重及血脂。4.内质网自噬-NLRP3炎性小体信号通路分子在颈动脉套管术后动脉粥样硬化易损斑块模型中具有显著作用。5.豁痰解毒通络方能够调控小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7中自噬及NLRP3炎性小体以抑制LPS诱导的过度炎症表达。6.豁痰解毒通络方能够通过调控内质网自噬-NLRP3炎性小体信号通路以抑制动脉粥样硬化易损斑块,为中医药治疗动脉粥样硬化易损斑块提供新的治疗靶点和理论依据。