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目的: 1、研究儿茶酚胺(肾上腺素和去甲肾上腺素)对心肌的毒性作用,探讨其作用机制。 2、进一步揭示心衰时循环内分泌的改变,特别是交感神经系统激活情况,了解其在心衰中的意义。 3、观察不同级别(NYHA)心功能患者心肌β受体变化(质和量),为心衰β受体阻滞剂的应用提供依据。 4、了解心衰究竟如何从代偿转变为失代偿,除与心肌细胞数量及心脏支架有关外,心肌细胞质的变化起着重要作用,这包括心肌结构蛋白及基因表达的异常。 5、筛选出那些预后严重,有猝死高危的心衰患者。 6、指导临床合理用药,特别是β受体阻滞剂在心衰中的应用,从而降低心衰的死亡率,改善其预后。 方法: 本实验分基础研究和临床研究两部分。 基础研究: 1、首先造模,建立肾上腺素和去甲肾上腺素所致兔心肌损害模型:按照Dowing法进行改良,并参照以往的研究进行造模。设立3组,分别是对照组、去甲肾上腺素组(NE组)和肾上腺素组(AD组),每组6只兔子。NE组给予去甲肾上腺素1mg/kg加入50ml生理盐水中静滴,AD组给予肾上腺素1mg/kg静滴,对照组用生理盐水50ml,均缓慢静滴90分钟。静滴完毕后,各组动物正常饲养(取心肌前12小时禁食但不禁水),48小时后从耳缘静脉注入空气造成肺栓塞,处死动物,立即剖胸,迅速从右心房或上、下腔静脉取血,经相应的处理后,分别送有关实验检查。同时取出尚在搏动的心脏,用生理盐水洗净,于左心室前壁切取1-2mm~3大小的组织块10粒,用2.5%戊二醛和1%锇酸固定,醋酸铀块染,再用酒精、丙酮进行脱水,环氧树脂包埋,切成超薄切片,枸橼酸铅片染,然后 南京医科大学博士学位论丈在电子显微镜下观察。另外,切取部分左。。室组织,采用 RTPCR测定凋亡基因 P53和 Caspase3的变化,以及采用放射免疫分析法测定心肌 cAMP含量,余下的心肌组织用10%甲醛浸泡、固定,石蜡包埋、切片,HE染色,作普通光镜检查。 2、研究肾上腺素和去甲肾上腺素对。U肌肌球蛋白重链基因表达的影。向。 3、观察a受体阻滞剂酚妥拉明汀egitine)和p受体阻滞剂艾司洛尔ksmdd)对去甲’肾上腺素所致。。肌损害的影响,以及代谢改变。 正 床研究: 1、充血性心力衰竭时机体神经体液系统改变及炎性细胞因子一肿瘤坏死因子化(TN’F化)、白细胞介素6门L6)水平的测定:神经内分泌的改变包括交感神经系统(SNS人 肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAS)和心钠素等。 2、观察充血性心力衰竭患者心肌损害情况,以及反映心衰预后的指标。 3、了解不同心功能(NAq1A)患者心肌p受体含量和。c肌p受体敏感性的变化,以及血浆 CAMP儿GMP比值的改变; 4、观察充血性。G力衰竭时。。肌肌球蛋白重链和轻链基因表达,并通过超声。。动图和有创心功能测定,检测有关』。功能(如EF值)和血流动力学指标,了解心肌肌球蛋白轻链与心功能的关系。结果: 基础研究: l、肾上腺素组和去甲肾上腺素组均显示心肌细胞发生明显脂肪变性,肌溶解,肌凝,淋巴细胞浸润,间质细胞增生;以及收缩带形成卜为,。肌早期坏死的标志),细胞核浓染、核固缩或核碎裂,横带间肌纤维结构遭到破坏,肌纹模糊不清。另外,,J、血管内可见血栓形成,胞内可见*、点状物浓染。 2、电镜观察所见:肾上腺素组表现为心肌细胞内线粒体肿胀,明显短缩、断裂、溶解、消失,有的线粒体膜破裂、崩解,胶原纤维断裂,基质电子密度降低,胞内糖原颗粒明显减少。去甲’肾上腺素组同样可见G肌 3 南京医科大学博士学位论文细胞内线粒体呈空泡样肿胀,线粒体略断裂、溶解,肌原纤维断裂,电子密度降低,糖原颗粒明显减少。在C肌细胞间毛细血管内可见小的血栓形成,毛细血管内皮细胞肿胀。此外,肾上腺素组和去甲肾上腺素组均可见数量不等的心肌细胞胞核形状不规则,核膜凹陷,核染色质边集,核固缩,胞浆凝集,空泡化,肌丝和致密体减少,细胞膜完整的区域,周围无炎性细胞漫润,此即凋亡的心肌细胞。生理盐水对照组心肌细胞来见病理损窖。 3、在生化检测方面,肾上腺素组、去甲肾上腺素组血CK-MB浓度均显著升高,表明去甲肾上腺素、肾上腺素对。。肌具有直接毒性作用;而且两组CAMP儿GMP比值以及心肌细胞内 CAMP含量均升高。p受体阻滞剂艾司洛尔*)和a受体阻滞剂酚妥拉明hegitin e能抑制NE、AD所致CAMP升高,从而降低血和心肌细胞内CAMP,同时还降低儿茶酚胺所致CK-MB升高,保护心肌细胞。 4、凋亡基因的检测发现,肾上腺素组和去甲肾上腺素组心肌细胞P53基因和Caspase3基因水平显著高于对照组沪<0刀5卜 而p受体阻滞剂艾司洛尔能阻止i所致凋亡基因P53和Caspase3的表达。 5、儿茶酚胺作用于心肌细胞后,心肌肌球蛋白重链(MHC)基