家蚕变态期中肠组织退化与二次发育的研究

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家蚕(Bombyxmori.)是全变态昆虫,在蛹变态期,其体内同时进行着激烈的幼虫组织解离和成虫组织发生的两种相反的过程,在这一过程中,幼虫组织有三种发育方向:(1)幼虫专性组织(如丝腺等)解离消亡;(2)部分幼虫组织(如消化道)通过细胞的新旧替换,更新发育为成虫组织;(3)由存在于幼虫体内的成虫器官芽(如翅芽等成虫盘)或组织干细胞发育成新的成虫组织。 家蚕中肠在变态期的退化涉及到细胞死亡,而执行何种死亡方式还未见到在关报道。勾了弄清家蚕中肠在变态期退化和二次发育重建的特点,本论文以家蚕7532为实验材料,火细胞凋亡与自噬性细胞死亡的角度,用外部形态解剖观察、内部结构石蜡组织切片观察和电子显微镜观察的方法,对中肠组织在变态发育时期细胞形态结构上发生变化的细青和过程进行研究分析,结合对此时期中肠细胞DNA-Ladder(DNA梯度)电泳谱特征的检测和对此时期的中肠细胞和血液中蛋白质变化的聚丙烯酰胺和双向凝胶电泳检测,开究家蚕在蛹变态期中肠组织器官的消亡和二次发育重建的特点,对昆虫变态期细胞程芋性死亡(programmedcelldeath,PCD)和胚后二次发育研究有理论意义。本文主要取得以下研究结果和新的发现: (1)在化蛹第2天时,家蚕成虫陀螺形中肠基本形成。化蛹第3天,中肠后部新生的回肠和直肠囊开始形成,化蛹第4天嗉囊开始形成。在化蛹第5天,具有陀螺形中肠与细长回肠、膨大的直肠囊和嗉囊的成虫消化道基本形成。 (2)中肠缩短缩小是由肠壁产生横向、纵向内折引起。内折在肠腔内不断退化消亡而外围细胞重新粘合形成新的肠壁。纵向内折持续时间较短,而横向的内折持续的时间较长,与缩短幅度较大一致。 (3)从熟蚕开始,旧的肠壁细胞大量退化脱落,新的肠壁细胞分化增殖,进行着脱落.增殖.脱落.增殖的循环过程,最终形成成虫中肠。退化与增殖的盛期在熟蚕吐丝初到化蛹2天,并一致持续化到羽化时。 (4)由电镜观察首次发现:在变态期的家蚕中肠组织内发生着旧细胞的裂解、形成自噬泡(Autophagosome)和凋亡小体(apoptoticbody),自噬泡对细胞部分细胞器和胞浆进行消化,同时吞噬细胞吞噬死亡细胞的残留物、自噬泡和凋亡小体。 (5)根据对从熟蚕吐丝初到化蛹4天中肠细胞DNA-Ladder的检测,进一步证实家蚕变态期的部分中肠细胞发生了细胞凋亡(apoptosis)。 (6)由此首次证实:在家蚕从熟蚕到羽化的变态期间,细胞凋亡和自噬性细胞死亡(autophagy)这两种程序性细胞死亡(PCD)的机制同时存在于中肠细胞的退化过程中,其中肠壁细胞的退化则以自噬性细胞死亡为主要方式,外层肌肉组织的退化则同时存在着细胞凋亡和自噬性细胞死亡。 (7)对变态期家蚕中肠和血液蛋白的SDS-PAGE电泳和双向电泳检测和分析,发现一些差异表达的蛋白,这些差异蛋白是否家蚕变态期的关联蛋白,还有待进一步研究。
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