论文部分内容阅读
目的构建miRNA-449a模拟物及抑制物模型探究其对人结肠癌细胞LoVo、SW480迁移及增殖能力的影响,为miR-449a在结肠癌细胞层面上的研究提供部分数据,在结肠癌临床的早期诊断、有效治疗及预后评估上提供一定理论依据。方法对人结肠癌细胞系HT-29、HCT-15、LoVo、SW480及人正常结肠上皮细胞NCM-460进行培养,通过实时定量PCR技术检测各组细胞中的miRNA-449a表达水平。根据结果从中选取差异较大的LoVo、SW480两组细胞,将上述两种细胞进行培养并均分为4组:分别转染miR-449a mimics、miR-449a mimics、NCmiR-449a inhibitor和miR-449a inhibitor NC构建miRNA-449a模拟物和抑制物模型及其相应NC模拟物。构建模型成功后,使用CCK-8试剂盒检测细胞增殖状况、通过细胞划痕实验检测细胞迁移能力,探究miRNA-a449对人结肠癌细胞LoVo、SW480的迁移及增殖的影响。通过Western blot实验检测增殖相关抗体蛋白β-catenin、迁移相关抗体蛋白E-Cadherin的表达情况。结果对比人正常结肠上皮细胞,miR-449a在人结肠癌细胞HT-29、HCT-15、SW480及LoVo中均呈现低表达,其中以SW480和LoVo细胞表达量最低;通过构建miRNA-449a模拟物模型后发现,结肠癌细胞LoVo和SW480的细胞增殖、迁移能力减弱,而在miRNA-449a抑制物模型中结肠癌细胞的增殖、迁移能力有所增加;Western blot实验结果显示,在模拟物模型中增殖相关蛋白β-catenin、迁移相关蛋白E-Cadherin的表达受抑制,而在抑制物模型中增殖相关蛋白β-catenin、迁移相关蛋白E-Cadherin的表达有所增强。结论转染miRNA-449a模拟物或抑制物后可在一定程度上影响结肠癌细胞的增殖和迁移能力,且该作用效果对LoVo细胞更显著。图8幅;表20个;参考文献170篇。