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近来研究发现，p62作为多种信号传导途径中的支架蛋白，能通过C末端泛素相关结构域（ubiquitin-associated domains，UBA）与泛素化靶蛋白结合，并通过LRS（LC3 recognition sequence，LRS）结构域与LC3结合，然后由LC3介导将泛素化靶蛋白包裹入自噬小体，最后自噬小体与溶酶体融合完成蛋白的降解。因此，p62在两种蛋白降解途径（蛋白酶体降解途径和自噬降解途径）之间发挥着重要的桥梁作用。
本研究拟构建p62蛋白原核表达质粒，转化细菌后表达并纯化p62蛋白，为制备抗p62抗体及细胞内p62蛋白的检测提供基础。
目的：构建p62蛋白的原核表达载体，原核表达并纯化p62蛋白。
方法：
1.pET28a（+）-p62质粒的构建：PCR扩增p62蛋白的编码基因片段，双酶切后插入pET28a（+）载体，转化细菌后采用PCR、酶切、DNA序列测定等方法，鉴定pET28a（+）-p62质粒；
1.将pET28a（+）-p62质粒转化表达菌，诱导p62表达。通过SDS-PAGE检测探讨诱导时间、IPTG浓度等因素对p62表达的影响；
2.运用His-Bind树脂纯化p62蛋白并用Western Blot方法进行纯化鉴定。
结果：
1.1经PCR、酶切、DNA序列测定等方法证实，成功构建了p62蛋白的原核表达载体-pET28a（+）-p62质粒；
2.4小时、0.1mMIPTG浓度为最佳诱导p62蛋白原核表达的条件；
3.Western Blot方法检测显示，成功纯化了p62蛋白。
结论：成功表达并纯化了p62蛋白，为制备抗p62抗体提供了基础。